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HDAC廣譜抑制劑(PCI-24781)

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更新時間:2022-05-23 13:47:48瀏覽次數(shù):225次

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貨號 FS-X10746
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LC1(Human liver cytosolantibody type 1) ELISA Kit

中文名稱:HDAC廣譜抑制劑(PCI-24781)

英文名稱:PCI-24781

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號:FS-X10746

產(chǎn)品介紹:

PCI-24781(Abexinostat;CRA024781)是一種新的HDAC廣譜抑制劑,主要靶向HDAC1的Ki值為7nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:783355-60-2

別名:CRA 024781;CRA 24781;Abexinostat

純度:97.94%

分子量:397.42

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

柱孢菌屬p27(抗原)Anti-GCHFR Antibody人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)

Enterobacter sichuanensisP63 腫瘤抑制基因(抗原)Anti-GCLM Antibody人肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A(SP-A)

皺折裸胞殼護骨(多肽抗原)Anti-GCNT6 Antibody人幽門螺桿菌相關(guān)基因蛋白A-IgG(HP-CagA-IgG)

解淀粉芽孢桿菌骨保護蛋白配體(抗原)Anti-GDF15 Antibody人幽門螺桿菌相關(guān)基因蛋白A-IgG(HP-CagA-IgG)

蘇云金芽胞桿菌增生性瘢痕相關(guān)蛋白(抗原)Anti-GCNT7 Antibody人粘蛋白/粘液7(MUC7)

三葉草根瘤菌多腺二磷多聚抗原Anti-GDF1 Antibody人粘蛋白/粘液7(MUC7)

草假單胞菌內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪(人:N端多肽)、內(nèi)臟脂肪、 又稱:前B克增強因子、內(nèi)肥、腹脂Anti-GDF5 Antibody人轉(zhuǎn)谷酰2C多肽(TGM2)

灰色鏈霉菌內(nèi)脂/內(nèi)臟脂肪Anti-GDF3 Antibody人轉(zhuǎn)谷酰2C多肽(TGM2)

Streptomyces內(nèi)脂/B克增強因子Anti-GDF6 Antibody人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)

蘋果黑腐皮殼菌色上皮源性因子(多肽抗原)Anti-GDF2 Antibody人Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)

假單胞菌屬磷脂磷2C(抗原)Anti-GDF7 Antibody人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ⅠCTP)

產(chǎn)凍膠菌腸道肽轉(zhuǎn)運蛋白(小肽轉(zhuǎn)運蛋白)多肽Anti-GDI1 Antibody人Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽(ⅠCTP)

出芽短梗霉一種腫瘤抑制基因抗原Anti-GFER Antibody人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)

墳?zāi)构?jié)桿菌孕激誘導(dǎo)阻斷因子(抗原)Anti-GDI2 Antibody人Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)

根瘤菌piwi 樣1蛋白(抗原)Anti-GFM2 Antibody人粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)

枯草芽孢桿菌過氧化活化增生受體γ(抗原)Anti-GGA1 Antibody人粘蛋白/粘液5AC(MUC5AC)

Saitohin蛋白抗體木霉屬人結(jié)腸癌細(xì)胞

線粒體琥珀脫氫D抗體蠟狀芽孢桿菌人回盲腸癌細(xì)胞

超氧化物歧化4抗體霍氏腸桿菌人慢性髓原白血病細(xì)胞

沉默調(diào)節(jié)相關(guān)蛋白6抗體大腸埃希氏菌人乳腺浸潤性導(dǎo)管癌旁皮膚細(xì)胞
HDAC廣譜抑制劑(PCI-24781)大斑凸臍蠕孢 S-芐基-L-半胱白介1受體拮抗劑

枯草芽孢桿枯草亞種 2--6-甲基煙乳清蛋白

葡萄座腔 內(nèi)消旋-2,3-二巰基丁二結(jié)核病

短小芽孢桿 2-噻吩乙β2微球蛋白

菊池鏈格孢 1-(2-)β-乳球蛋白

鏈球(不定種) 2-溴噻唑環(huán)磷腺

大腸埃希氏桿 膽固油酯乳房鏈球

蠟樣芽孢桿 3,5-二苯腫瘤壞死因子γ

羅倫隱球酵母羅倫變種 3-溴-4-甲基噻吩β干擾

谷棒桿 N,N,N',N'',N''-五甲基二乙烯基三細(xì)粒棘球絳蟲抗體

癭青霉 3,4-二苯甲酰β內(nèi)酰

釀酒酵母 哌-2-羧牛血清白蛋白

頂青霉 油酰神經(jīng)元烯化

白靈側(cè)耳 3,5-二甲基異噁唑皮質(zhì)酮;腎上腺酮

干酪乳桿 烯苯S100B蛋白

 


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