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PAK1抑制劑(IPA-3)

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 16:14:25瀏覽次數:221次

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貨號 FS-X10965
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產品介紹:

IPA-3是一種選擇性的,ATP非競爭的PAK1抑制劑,IC50值為2.5μM,對PAKs4-6沒有抑制作用。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

號:42521-82-4

純度:98.0%

分子量:350.45

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

中文名稱:PAK1抑制劑(IPA-3)

英文名稱:IPA-3

產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號:FS-X10965

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

枯草芽孢桿菌枯草亞種人腫瘤壞死因子相關弱凋亡誘導因子Bacillus thuringiensis小鼠N端前腦鈉(NT-proBNP)

白僵菌人IPO-38蛋白Bacillus thuringiensis小鼠纖溶抗纖溶復合物(PAP)

枯草芽孢桿菌人切除修復交叉互補基因1Bacillus thuringiensis小鼠纖溶抗纖溶復合物(PAP)

銅綠假單胞菌人羰基化蛋白Bacillus thuringiensis小鼠凝血抗凝血復合物(TAT)

綠色木霉人磷化核因子κB抑制蛋白α(IKKα human )Bacillus thuringiensis小鼠凝血抗凝血復合物(TAT)

釀酒酵母人樁蛋白Bacillus thuringiensis小鼠抗凝血受體(ATR)

彎孢人小表皮粘蛋白Bacillus thuringiensis小鼠抗凝血受體(ATR)

大腸埃希菌人類似60S核糖體蛋白L21Bacillus thuringiensis小鼠凝血受體(TR)

紫色鏈霉菌人類粘蛋白2Bacillus thuringiensis小鼠凝血受體(TR)

平滑假絲酵母人MAX二聚化蛋白1Bacillus thuringiensis小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)

硬皮馬勃屬人水閘蛋白14Bacillus thuringiensis小鼠心肌肌鈣蛋白Ⅰ(cTn-Ⅰ)

銹色野野村氏菌人可溶性半乳糖結合凝集3Bacillus thuringiensis小鼠磷肌3激(PI3K)

乳粉  沙門氏菌(陰性)人主要穹窿蛋白Bacillus thuringiensis小鼠磷肌3激(PI3K)

小卷霉人泛蛋白DBacillus thuringiensis小鼠β內啡肽(β-EP)

露濕漆斑菌人toll樣受體2Bacillus thuringiensis小鼠β內啡肽(β-EP)

根霉年2型血色沉著癥/幼年型血色病相關蛋白2Bacillus thuringiensis小鼠缺血修飾白蛋白(IMA)

少突膠質細胞轉錄因子2抗體豹斑毒鵝膏菌正常大鼠腎細胞

增食欲B/欲激B亞拉巴馬全緣孔菌非洲綠猴腎細胞

寡腺合成-1斑點嗜藍孢孔菌人APP-PS1雙基因轉染CHO細胞株

陽離子轉運器1抗體小果雞樅小鼠睪丸上皮細胞15P-1(干細胞庫保藏)
PAK1抑制劑(IPA-3)日本根霉 2-乙酰α葡萄糖

釀酒酵母 托品酮促性腺抑制

少根根霉 雌三磷化腺活化蛋白激

漢遜德巴利酵母 犬尿喹啉磷化蛋白激A

榆黃菇 β-Tocotrienol增殖相關蛋白

香菇 3-甲基鄰苯二叉頭蛋白L2

芽孢桿屬 1-氨基茚滿類固生成因子1

哈茨木霉 SorafenibDoublesex和Mab-3相關轉錄因子

科赫芽胞桿 Sorafenib叉頭型基因P3

大腸埃希 Canertinib (CI-33)腺環化

釀酒酵母 遠志擴張性共濟失調突變因子

疣梗青霉 α-托品半胱雙加氧

變異鏈球 咖啡苯乙酯半胱亞磺脫羧

蠟樣芽孢桿 水蘇四糖,四水維生D

三方氏酵母 α-松脂交替氧化

 


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