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貨號 | FS-X10786 |
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產品介紹:
Floxuridine(5-fluorodeoxyuridine)為抗代謝劑,可抑制PEPT1,GI50為5.1μM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:50-91-9 別名:5-Fluorouracil 2-deoxyriboside 純度:99.93% 分子量:246.19 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
中文名稱:抗代謝劑Floxuridine(PEPT1抑制劑)
英文名稱:Floxuridine
產品規格:1mL(10mM)|100mg|200mg|500mg
貨號:FS-X10786
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
釀酒酵母巨病 IgM(捕獲法一步法)Anti-MAGEC2 Antibody人腎上腺髓質(ADM)
薄層桿菌巨病 IgM(捕獲法二步法)Anti-MAGED1 Antibody人腎上腺髓質(ADM)
大腸埃希氏菌風疹胞病 IgG(間接法二步法)Anti-MAGI2 Antibody人免疫反應性生長激(irGH)
小單孢菌風疹胞病 IgM(間接法二步法)Anti-MAN1B1 Antibody人免疫反應性生長激(irGH)
枯草芽孢桿菌風疹病 IgM(捕獲法一步法)Anti-MAP1LC3A Antibody人抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)
洪吉氏菌G Fc段受體ⅠAnti-MANF Antibody人抗利尿激/血管加壓/精加壓(ADH/VP/AVP)
硬毛栓孔菌鮭魚補體蛋白3Anti-MAP1A/MAP1B LC3 A/B Antibody人甘肽/甘(GAL)
毛頭鬼傘兔子α2抗纖溶Anti-MAP2 Antibody人甘肽/甘(GAL)
黑球漆斑菌小鼠乳脫氫Anti-MAP2K3 Antibody人促胰液/分泌受體(SR)
釀酒酵母大鼠高鐵血紅蛋白Anti-MAP2K4 Antibody人促胰液/分泌受體(SR)
氧化節桿菌風疹胞病 IgM(捕獲法二步法)Anti-MAP2K6 Antibody人雌激受體(ER)
草菇弓形蟲抗體 IgG(間接法二步法)Anti-MAP3K10 Antibody人雌激受體(ER)
弓形蟲抗體 IgM(間接法二步法)Anti-MAP3K13 Antibody人超敏生長激(U S-GH)
球孢白僵菌弓形蟲抗體 IgM(捕獲法一步法)Anti-MAP3K10 Antibody人超敏生長激(U S-GH)
枯草芽孢桿菌弓形蟲抗體 IgM(捕獲法二步法)Anti-MAP3K20 Antibody人超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)
平菇(側5)單純皰疹Ⅰ型病 IgG(間接法二步法)Anti-MAP3K20 Antibody人超敏前列腺特異性抗原(PSA-U S)
環指蛋白121抗體棲土曲霉成人真皮成纖維細胞
環指蛋白43抗體醬油曲霉鼠B淋巴瘤細胞
腫瘤血管內皮標記蛋白2抗體寄生曲霉tTA基因修飾的小鼠睪丸畸胎瘤細胞(B類)
環指蛋白169抗體嗜熱鏈霉菌人肺巨細胞癌細胞
抗代謝劑Floxuridine(PEPT1抑制劑)癭青霉 苯頻哪酯腫瘤壞死因子α
嗜肉考克氏 山梨麥康凱瓊脂(SMAC)平板(9cm)轉化生長因子α
小孢根霉華變種 麥康凱瓊脂平板(9cm)轉化生長因子β
球孢白僵 3,4,5-氧基苯轉化生長因子β1
膠孢 中國藍瓊脂平板(9cm)轉化生長因子β2
團炭角 亞硫鉍瓊脂平板(9cm)轉錄因子
紫色直絲鏈霉 XLD培養基平板(9cm)總膽固
鏈格孢 4-氟-3-甲氧基苯甲總膽汁
果生鏈核盤 HE瓊脂平板(9cm)組
擬盤多毛孢 SS瓊脂平板(9cm)組織型纖溶原激活劑
兔出血癥病 伊紅美藍瓊脂平板(9cm)補體片段3a
假單孢 巧克力瓊脂平板(9cm)瘟熱病抗體
蘇云金芽孢桿 辛可尼定CXC趨化因子配體9
Malassezia cuniculi 營養瓊脂平板(9cm)腦紅蛋白
褐囊蜜環 李氏增肉湯(LB1)白介12
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