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CDK1-cyclinB復合體和GSK-3抑制劑

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廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-20 16:14:10瀏覽次數:218次

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貨號 FS-X10645
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中文名稱:CDK1-cyclinB復合體和GSK-3抑制劑

英文名稱:BIO

產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號:FS-X10645

產品介紹:

BIO是一種有效的,選擇性的GSK-3和CDK1-cyclinB復合體抑制劑,能夠抑制GSK-3αβ/CDK1/CDK5的活性,IC50值分別為5nM/320nM/80nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

號:667463-62-9

別名:6BIO;GSK 3 IX;GSK 3 Inhibitor IX;MLS 2052

純度:98.37%

分子量:356.17

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

巴斯德畢赤酵母PE-CY5標記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody芳基硫酯E(ARSE)

地衣芽孢桿菌APC標記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody芳基硫酯D(ARSD)

單胞菌屬Alexa Fluor 350標記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody芳基硫酯B(ARSB)

克魯斯假絲酵母Alexa Fluor 647標記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody芳基硫酯A(ARSA)

糙皮側耳PE-Cy5.5標記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF4 Antibody泛激4(PANK4)

球毛殼菌(可訂購)PE-Cy7標記的兔抗狗IgGAnti-TNFRSF8 Antibody泛激3(PANK3)

綠木霉Alexa Fluor 488標記的兔抗狗IgGAnti-TNFSF10 Antibody泛激2(PANK2)

副豬嗜血桿菌Alexa Fluor 555標記的兔抗狗IgGAnti-TNFSF10 Antibody泛激1(PANK1)

假單胞菌PE-CY5標記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF11 Antibody泛特異性肽8(USP8)

歧異假絲酵母APC標記的兔抗羊IgGAnti-TNFRSF8 Antibody泛羧基端酯L1(UCHL1)

黑曲霉PE-Cy3標記的兔抗羊IgGAnti-TNFRSF9 Antibody泛連接E3A(UBE3A)

旋毛殼Alexa Fluor 350標記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF11 Antibody泛結合E2C結合蛋白E2L3(UBE2L3)

黃暗青霉Alexa Fluor 488標記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF12 Antibody泛結合E2C(UBE2C)

雅致小克銀漢霉Alexa Fluor 555標記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF13 Antibody泛結合E2A(UBE2A)

固氮菌Alexa Fluor 647標記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF13B Antibody泛交叉反應蛋白(UCRP)

繩狀青霉PE-Cy5.5標記的兔抗羊IgGAnti-TNFSF13B Antibody泛激活樣蛋白(UBE1L)

3磷肌依賴性蛋白激1抗體渾濁紅球菌人體腦靜脈血管組織提取物

p53結合蛋白1抗體開菲爾乳桿菌人體腦膜組織提取物

腫瘤壞死因子受體相關蛋白2抗體土白蟻叢毛單胞菌人小腦組織提取物

蛋白調解因子7抗體韓國叢毛單胞菌人腦動脈血管組織提取物
CDK1-cyclinB復合體和GSK-3抑制劑薄層屬 1H,1H,2H,2H-全氟癸基三乙氧基硅烷糜蛋白

西唐氏鏈霉 蟾蜍甘油三酯

黑曲霉 α-己基肉桂谷轉氨

*灰葡萄孢 4-吡啶-3-甲膽固

熒光假單胞 (S)-(+)-4-芐基-3-酰-2-惡唑烷酮谷草轉氨

大腸埃希氏 二苯并噻吩砜球蛋白

擴展短桿 4-氨基-4'-硝基二苯基硫超氧化物歧化

硬結桿 硫釹(III) 水合物谷轉氨

糖化酵母 (2S,3R)-(+)-2-氨基-3-羥基-4-甲基戊過氧化氫

釀酒酵母 1-十二烷基磺酰堿性磷

根瘤 (S)-1-Boc-3-羥基吡咯烷孕

孟氏假單胞 化鋅基質金屬蛋白抑制劑-1

芍藥枝孢霉 1-Boc-3-吡咯烷酮基質金屬蛋白抑制劑-2

Lysinibacillus xylanilyticus 化釓(III)腎上腺

齒孢青霉 鉺標準溶液吡啶諾琳

 


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