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胸苷磷酸化酶抑制劑(TFT)

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 14:25:04瀏覽次數:186次

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貨號 FS-X10784
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中文名稱:胸苷磷酸化酶抑制劑(TFT)

英文名稱:Trifluorothymidine

產品規格:1mL(10mM)|50mg|100mg|200mg

貨號:FS-X10784

產品介紹:

Trifluorothymidine是胸苷磷酸化酶(thymidine phosphorylase)抑制劑,還能抑制胸苷酸合成酶(thymidylate synthase)。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

號:70-00-8

別名:Trifluridine;FTD;5-Trifluorothymidine;NSC 529182;NSC 75520

純度:99.69%

分子量:296.2

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

木賊鐮孢乙型肝炎e抗原Anti-LPAR5 Antibody人反狀腺原(rT3)

根瘤菌乙型肝炎e抗體Anti-LRG1 Antibody人反狀腺原(rT3)

美澳型核果褐腐病菌乙型肝炎核心抗體Anti-LPCAT2 Antibody人6前列腺F1a(6-keto-PGF1a)

韓國假單胞菌乙型肝炎核心抗體 IgMAnti-LRP10 Antibody人6前列腺F1a(6-keto-PGF1a)

蛹蟲草(北冬蟲夏草、北蟲草)(可訂購)促黃體生成Anti-LRP10 Antibody人戊糖(Pentosidine)

緊密毛霉促卵泡生成Anti-LRP3 Antibody人戊糖(Pentosidine)

固氮螺菌屬催乳Anti-LRP11 Antibody人變腎上腺(MN)

谷棒狀桿菌孕Anti-LRRC41 Antibody人變腎上腺(MN)

鞘盒菌屬游離T4Anti-LRRC41 Antibody人多巴D1受體(D1R)

堅硬芽孢桿菌狀腺原(T3)Anti-LRRK1 Antibody人多巴D1受體(D1R)

蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種G Fc段受體ⅡAnti-LTB Antibody人腎上腺能a1A受體(ADRA1A)

葡萄座腔菌兔粒集落激因子Anti-LTB Antibody人腎上腺能a1A受體(ADRA1A)

枯草芽孢桿菌甲狀腺(T4)Anti-LTBR Antibody人早老2(PS-2)

粉紅單端孢霉魚類主要組織相容性復合體Anti-LTO1 Antibody人早老2(PS-2)

檸檬黃色農球菌大鼠c-Jun基末端激Anti-LTK Antibody人異腎上腺(iso-Hyd)

油菜菌核病菌小鼠絲/蘇蛋白磷Anti-LUC7L2 Antibody人異腎上腺(iso-Hyd)

畸胎瘤癌基因RAS相關抗體反曲毛殼小鼠髓樣乳腺癌細胞

Ras-GTP激活蛋白3抗體橄欖包毛殼大鼠肝竇內皮細胞

RAS相關GTP結合蛋白A抗體球毛殼L-WRN

G蛋白家族RAB21蛋白抗體長刺毛殼正常人表皮角質形成細胞
胸苷磷酸化酶抑制劑(TFT)金針菇(毛柄、冬菇) 含90ml磷鹽緩沖液均質袋血清鐵

枯草芽孢桿 改良CCDA瓊脂平板(9cm)血清總補體

黃曲霉 甲基烯四氫糠基酯血栓A2

孢小克銀漢霉輪生變種 改良CCDA瓊脂平板(9cm)血栓B2

糙孢曲霉 BCYE-CYS瓊脂平板(9cm)血栓調節蛋白

假絲酵母屬 甘露卵黃多粘瓊脂平板(9cm)血小板活化因子

淡紫擬青霉 2-甲基-6-乙基苯(MEA)血小板膜糖蛋白Ⅱb;Ⅲa

伯頓絲孢畢赤酵母 改良Skirrow氏瓊脂平板(9cm)血小板衍生生長因子

彩色豆馬勃 TSA培養基平板(9cm)血小板衍生生長因子AB

土曲霉 含青霉TSA培養基平板(7cm)氧化低密度脂蛋白

枯草芽孢桿 2,6-二異基苯(DIPA)

柱形胞鏈霉 NA平板(加青霉)(9cm)一氧化氮

多形布勒擔子酵母 我妻氏血瓊脂平板(9cm)一氧化氮合成

多噬伯克霍爾德氏 慶大霉瓊脂平板(9cm)胰島

根霉 玫瑰紅鈉瓊脂平板(9cm)胰島樣生長因子2

 


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