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貨號 | FS-X10492 |
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培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:BRafV600E抑制劑(LGX818)
英文名稱:LGX818
產品規格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg
貨號:FS-X10492
產品介紹:
英文名稱:LGX818 產品規格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg LGX818是一種可突變體BRafV600E的抑制劑,IC50值為0.3nM,具有良好的抗腫瘤功效。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:1269440-17-6 別名:Encorafenib 純度:99.88% 分子量:540.01 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
巨型艾美耳球蟲磷化Src原癌基因抗體Anti-FSCN1 Antibody信號淋巴激活分子家族成員7(SLAMF7)
高地芽孢桿菌STAC2蛋白抗體Anti-FSHB Antibody(PB0138)信號傳導轉錄激活因子6(STAT6)
土曲霉轉錄因子SOX30抗體Anti-FSHR Antibody信號傳導轉錄激活因子5B(STAT5B)
產堿假單胞菌13號染色體開放閱讀框32抗體Anti-FST Antibody信號傳導轉錄激活因子5A(STAT5A)
布雷正青霉線粒體相關富含半胱蛋白抗體Anti-FSHR Antibody信號傳導轉錄激活因子4(STAT4)
美澳型核果褐腐病菌跨膜接頭蛋白SIT抗體Anti-FURIN Antibody信號傳導轉錄激活因子3(STAT3)
黏結珊瑚狀放線菌SKAP55蛋白抗體Anti-FSTL3 Antibody信號傳導轉錄激活因子2(STAT2)
栗疫菌沉默調節相關蛋白2抗體Anti-FUS Antibody信號傳導轉錄激活因子1(STAT1)
木耳腫瘤/抗原11.2抗體Anti-FUT4 Antibody鋅指同源框蛋白4(ZFHX4)
巨大芽孢桿菌平滑肌蛋白抗體Anti-FUT1 Antibody鋅結合α2-糖蛋白1(αZGP1)
香菇SHROOM1蛋白抗體Anti-FUT3 Antibody心臟肌球蛋白結合蛋白C(MYBPC3)
土生叢毛單胞菌磷化沉默調節蛋白1抗體Anti-FXYD1 Antibody(PB0740)心營養樣因子1(CLCF1)
枯草芽孢桿菌SCK蛋白抗體Anti-FZD1 Antibody心型脂肪結合蛋白(FABP3)
根霉磷鈉協同轉運蛋白抗體Anti-FZD3 Antibody心磷脂酰基轉移1(LCLAT1)
異酒香酵母精結合蛋白2抗體Anti-FZD4 Antibody心磷脂合(CLS)
蠟狀芽孢桿菌唾液結合性免疫球蛋白樣凝集1抗體Anti-G6PD Antibody心肌營養1(CT1)
Sestrin3抗體費氏桿菌謝氏亞種HK-2人腎皮質曲小管上皮細胞
癲癇樣相關蛋白6抗體大腸埃希氏桿菌原代細胞
組蛋白連接作用蛋白抗體螢光假單胞菌人成骨細胞
線粒體乙酰化3抗體潮濕纖維單孢菌人關節軟骨細胞
BRafV600E抑制劑(LGX818)軍威鎮梅奇酵母 2-溴-3'-羥基苯乙酮角蛋白18-M30
植物乳桿植物亞種 Gly-His磷化信號傳導子及轉錄激活子2
藤黃淺藤黃鏈霉 1,4-二(二甲基硅烷基)苯端粒
韓國游動微 4-氨基-3-甲氧基信號傳導子及轉錄激活子2
黑曲霉 烯基三丁基錫乳脫氫B
嗜乳桿 原酯酮脫氫激4
短波單胞 Boc-Orn(Z)-OHγ氨基丁轉氨
山梨木糖假絲酵母 四正丁基硫IκB激-α
器腐霉 4-吡咯烷丁色P4503A2
害艾美耳球蟲 魏因勒卜鏈接劑色P4502C11
黑木耳 4-甲基-1-茚酮可溶性FMS樣酪激1
蘋果黑腐皮殼 Grubbs 2 代催化劑含核結合寡聚化域蛋白2
燼灰孢鏈霉 4-羧基苯肼鹽鹽β-防御-14
桔青霉 3-苯基-1H-吡唑可溶性Endoglin
釀酒酵母 1,3-雙(2,4,6-苯基)-4,5-二氫咪唑鎓四氟鹽帶3蛋白
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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