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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
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微管(tubulin)抑制劑(MMAD)

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產(chǎn)品型號(hào)

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-24 15:27:40瀏覽次數(shù):237次

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貨號(hào) FS-X11070
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Rat IgA/FITC 熒光標(biāo)記兔抗大鼠IgA抗體鉻 AR
ABI1/SSH3BP1/FITC 熒光標(biāo)記ABI1/SSH3BP1蛋白抗體IgG鉻 CP
ACD/PTOP/FITC 熒光標(biāo)記腎上腺皮質(zhì)發(fā)育異常蛋白抗體IgG鉻 GR
ACE

產(chǎn)品介紹:

MMAD是一種有效的微管(tubulin)抑制劑,是抗體藥物偶聯(lián)物(ADCs)中的活性分子。

注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號(hào):203849-91-6

別名:Demethyldolastatin 10;Monomethylauristatin D;Monomethyl Dolastatin 10

純度:99.28%

分子量:771.06

儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱:微管(tubulin)抑制劑(MMAD)

英文名稱:MMAD

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào):FS-X11070

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

TTC33蛋白抗體 TTC33

四分子交聯(lián)體2抗體(四旋蛋白) TSPAN2

四分子交聯(lián)體3抗體(四旋蛋白) TSPAN3

T淋巴細(xì)胞白血病同源蛋白2抗體 TLX2

跨膜蛋白132A抗體 TMEM132A

四聚體多肽蛋白21B抗體 TTC21B

原肌球蛋白1抗體 Tropomyosin

轉(zhuǎn)錄增強(qiáng)因子TEF3抗體 TEF3

微管相關(guān)蛋白抗體 Tau protein

酪氨suan激meiA/B/C抗體 Trk A + B + C

核轉(zhuǎn)錄因子25抗體 Transcription factor 25

新型抑癌基因抗體 TBX2
微管(tubulin)抑制劑(MMAD)肉桂鏈霉 烯

細(xì)孢毛霉 Camaric acid

釀酒酵母 Buergerinin G

矮棒曲霉 沙紙寧C

擬無枝屬 Borreriagenin

節(jié)桿 Boeravinone B

普通裂褶 2-脫氧-2,2-二氟-D-赤型-1-呋喃酮糖-3,5-二苯甲酰酯

谷棒桿Ⅳ型 1,6-二磷果糖鎂鹽

羊肚(不能訂購) 1,6-二磷果糖一鈣鹽

彩色豆馬勃 L-阿拉伯樹膠糖

平菇 麥芽四糖

水生拉恩氏 L-甘露糖

煙管 5-尿三磷二鈉鹽

滑假絲酵母 酮

蒼白堿線 針葉櫻桃提取物

 


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