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貨號	FS-X10888

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：Jumonji組蛋白去甲基酶抑制劑（JIB-04）

英文名稱：JIB-04

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10888

產(chǎn)品介紹:

JIB-04是Jumonji組蛋白去甲基酶(Jumonji histone demethylase)廣譜抑制劑，能抑制JARID1A，JMJD2E，JMJD3，JMJD2A，JMJD2B，JMJD2C和JMJD2D的活性，其IC50值分別為230，340，855，445，435，1100和290nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：199596-05-9

純度：97.95%

分子量：308.76

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

豬丹絲菌小鼠白介1βAnti-SMARCC2 Antibody人可溶性血纖蛋白單體復(fù)合物(SFMC)

短波單胞菌人抗紡錘體抗體Anti-SMC1A Antibody人血清白蛋白(HSA)

鞘單胞菌屬大鼠巨噬炎性蛋白2Anti-SMARCAL1 Antibody人血清白蛋白(HSA)

漏斗多孔菌小鼠肌紅蛋白Anti-SMG7 Antibody人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)

熱噬淀粉芽孢桿菌人抗角蛋白抗體Anti-SMYD2 Antibody人2,3Dinor血栓烷B2(2,3-dinor-TXB2)

好熱地芽孢桿菌小鼠血栓B2Anti-SNAPC5 Antibody人11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)

提純牛型結(jié)核菌大鼠巨噬炎性蛋白3βAnti-SNCA Antibody人11去氫血栓烷B2(11-DH-TXB2)

炭黑曲霉大鼠基質(zhì)金屬蛋白1Anti-SNCA Antibody人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)

醬油曲霉人抗中性粒核周抗體Anti-SNX3 Antibody人血栓調(diào)節(jié)蛋白(TM)

土味鏈霉菌小鼠乙酰Anti-SNCB Antibody人纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)

黃褐杯傘大鼠尾加壓2Anti-SND1 Antibody人纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物(TAFI)

紫絳紅鏈霉菌人抗中性粒胞漿抗體Anti-SOD2 Antibody人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)

枯草芽孢桿菌小鼠白三烯B4Anti-SOS2 Antibody人血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)

枯草芽孢桿菌人抗凝血抗體Anti-SNX3 Antibody人血小板反應(yīng)蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)

肉糜貓?jiān)葱猿煞郑ǘㄐ裕┐笫蠡|(zhì)金屬蛋白13Anti-SOD3 Antibody人血小板反應(yīng)蛋白/凝血敏感蛋白1(TSP-1)

樟疫霉小鼠白血病抑制因子受體Anti-SOX12 Antibody人血漿α顆粒膜蛋白(GMP-140)

環(huán)腺應(yīng)答元件結(jié)合蛋白轉(zhuǎn)錄共激活因子TORC1抗體糞生黑蛋巢菌（斜面）HSP70

四環(huán)抗體黃孢原毛平革菌GC-5D1

T細(xì)胞受體γ抗體撕裂蠟孔菌11B6

轉(zhuǎn)錄因子3抗體螺旋環(huán)螺旋蛋白HE47芽孢桿菌1D12-B5
Jumonji組蛋白去甲基酶抑制劑（JIB-04）哈茨木霉 2-氟-6-(三氟甲基)苯甲異檸檬脫氫

中慢生華癸根瘤氨氮/NH3-N血鈣

枯草芽孢桿氨/NH3肉堿脂酰轉(zhuǎn)移I

蒼白枝孢 2--5-硝苯糞臭

勝利油田鹽單胞釔/Y雙氫睪酮

枯草芽孢桿 1,4-雙[2-(2-基)乙烯基]苯去氫表雄酮

聚貪噬镥/Lu旋毛蟲

枯草芽胞桿鐿/Yb囊蟲

解淀粉芽孢桿二苯并噻吩3-甲基

摩氏變形銩/Tm生長停滯特異性蛋白6

金黃殼囊孢氧芴急性期蛋白

淺紫鏈霉鉺/Er超敏C反應(yīng)蛋白

酵母鈥/Ho黃曲霉B1

曲霉 2--4,6-二甲氧基嘧啶胰多肽

大腸埃希氏鏑/Dy腺病
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)