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貨號 | FS-X10559 |
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培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
中文名稱:磷脂酶C抑制劑(D609)
英文名稱:phosphatidyl choline-specific phospholipase C inhibitor
產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10559
產品介紹:
D609是一種選擇性的磷脂酰dan堿特異性的磷脂酶C(phosphatidyl choline-specific phospholipase C)抑制劑,Ki值為6.4μM,常用于抗病毒和抗腫瘤研究。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:83373-60-8 純度:98.0% 分子量:266.46 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
聚生殼菌ZCWCC1抗體Anti-MT-CO1 Antibody葡萄糖轉運蛋白9(GLUT9)
破傷風梭菌鋅指蛋白300抗體Anti-MT-ND4 Antibody葡萄糖轉運蛋白8(GLUT8)
葡萄座腔菌鋅指蛋白ZBTB39抗體Anti-MTA2 Antibody葡萄糖轉運蛋白7(GLUT7)
釀酒酵母鋅指蛋白201抗體Anti-MTA1 Antibody葡萄糖轉運蛋白6(GLUT6)
球孢白僵菌鋅指蛋白Zic2抗體Anti-MTOR Antibody葡萄糖轉運蛋白5(GLUT5)
多主葡萄殼菌鋅指蛋白Zdhhc18抗體Anti-MTOR Antibody葡萄糖轉運蛋白2(GLUT2)
耐鹽枝孢鋅指蛋白Zdhhc12抗體Anti-MTDH Antibody(PB0309)葡萄糖轉運蛋白14(GLUT14)
肉桂色鏈霉菌著絲粒ZW10相互作用蛋白1抗體Anti-MTR Antibody葡萄糖轉運蛋白12(GLUT12)
土壤彎孢鋅指/環指蛋白1抗體Anti-MTTP Antibody葡萄糖轉運蛋白11(GLUT11)
維多利亞隱球酵母鋅指/環指蛋白2抗體Anti-MTUS1 Antibody葡萄糖轉運蛋白10(GLUT10)
假單胞菌鋅指蛋白3/環指蛋白3抗體Anti-MUC1 Antibody葡萄糖磷變位5(PGM5)
阪崎腸桿菌鋅指蛋白230抗體Anti-MUC1 Antibody葡萄糖磷變位3(PGM3)
多分枝毛霉鋅指脂蛋白-1b抗體Anti-MUC1 Antibody葡萄糖磷變位2樣蛋白1(PGM2L1)
角形小孔菌zeta相關蛋白70抗體Anti-MUC1 Antibody葡萄糖磷變位1(PGM1)
枯草芽孢桿菌白血病相關新基因抗體Anti-MUC1 Antibody(PB0154)葡萄糖磷變位(PGM2)
海仙菌屬鋅指蛋白307抗體Anti-MUC2 Antibody葡萄糖β(GUSβ)
神經降壓受體3抗體糖蛋白95假百喉棒桿菌人宮頸癌組織源細胞
轉錄因子SOX10抗體檸檬色明串珠菌人皮膚癌組織源細胞
增食欲A/欲激A抗體有害片球菌人子宮癌組織源細胞
鋅指蛋白339抗體假腸膜明串珠菌腸人直腸癌組織源細胞
磷脂酶C抑制劑(D609)小麥曲根霉 2-乙基-4-甲基噻唑多殺巴斯德氏
桃殼囊孢 3-芐氧基苯過氧化脂質;乳過氧化物
小孢根霉華變種 6-甲氧基萘-2-抗角蛋白抗體
嗜麥芽寡養單胞 雙A甘油酯組4型受體
植物乳桿 1-溴-4-乙氧基-2,3-二氟苯半胱蛋白10
蘇云金芽孢桿九州亞種 3,5-二氟代苯(含有數量不等的酐)半胱蛋白13
蕈狀芽孢桿 4-Boc-1-哌乙四環
皺狀假絲酵母 三(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮)釔(III)基質金屬蛋白抑制因子4
紡綞形賴芽孢桿 六氟磷7-氮雜苯并三唑-1-氧基三(二甲氨基)磷(AOP)KLHL4
枯草芽孢桿 六氟磷(7-氮雜苯并三唑-1-氧基)三吡咯烷磷凝血原
慢生根瘤 2-羥基乙基磺鈉過氧化3
解淀粉芽孢桿 鈉三水合物水通道蛋白1
淡紫擬青霉 順-二雙(三苯基膦)鉑(II), Pt min水通道蛋白2
竹瘤座 5-溴-2-水通道蛋白3
榛色假單胞 2-溴-1,3-二氟-5-苯水通道蛋白4
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
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