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ERK抑制劑(VX-11e)

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-20 16:33:19瀏覽次數:181次

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貨號 FS-X10675
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Rat Caspase-1

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱:ERK抑制劑(VX-11e)

英文名稱:VX-11e

產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號:FS-X10675

產品介紹:

VX-11e是一種高效的,具有選擇性的ERK抑制劑,Ki值<2nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途!

號:896720-20-0

純度:98.68%

分子量:500.35

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

圍小叢殼5-羥色受體2A抗原Anti-ALYREF(THOC4) pAb半胱蛋白抑制劑3(CST3)

根霉凝血Ⅱ(II)抗原Anti-ALYREF Antibody半胱蛋白抑制劑2(CST2)

聚生殼菌5-羥色受體3抗原Anti-AMBN Antibody半胱蛋白抑制劑11(CST11)

黑木耳(黑耳9號)5-羥色受體4抗原Anti-AMPD2 Antibody半胱蛋白抑制劑1(CST1)

寒冷桿菌粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗原Anti-AMOTL1 Antibody斑聯蛋白(ZYX)

硬水黃桿菌整合樣金屬蛋白與凝血1型-7抗原Anti-AMACR/p504S(Prostate Cancer Marker) Antibody白衍生趨化因子2(LECT2)

高溫黃灰鏈霉菌血管緊張原(抗原)Anti-AMPD2 Antibody白衍生趨化因子1(LECT1)

淡紫灰鏈霉菌5-脂氧合抗原Anti-ANAPC10 Antibody白特異性轉錄因子1(LST1)

玉黑粉菌辣根過氧化物標記整合樣金屬蛋白與凝血1型-7抗原Anti-ANAPC11 Antibody白免疫球蛋白樣受體亞家族A成員3(LILRA3)

旋絲毛殼載脂蛋白E(抗原)Anti-ANAPC2 Antibody白介24(IL24)

綿毛嗜熱絲孢菌Anti-ANAPC5 Antibody白激活黏附因子(ALCAM)

谷棒桿菌整合連接激-1Anti-ANGPTL7 Antibody白關聯免疫球蛋白樣受體2(LAIR2)

鹽長命菌屬北方菌芳香化(抗原)Anti-ANKRD20A3 Antibody白關聯免疫球蛋白樣受體1(LAIR1)

馬賽菌肺表面活性蛋白C抗原Anti-ANGPTL7 Antibody白彈性蛋白抑制因子(LEI)

大腸埃希菌肥大類糜蛋白1Anti-ANKRD26 Antibody白三烯A4水解(LTA4H)

木賊鐮刀菌銅藍蛋白抗原Anti-ANKRD1 Antibody白三烯A4(LTA4)

多囊腎蛋白1樣3抗體纖維堆囊菌大鼠角膜組織提取物

磷肌相互作用蛋白抗體解脂復膜孢酵母(亞羅解脂酵)大鼠腦靜脈血管組織提取物

浦肯野細胞萎相關蛋白1抗體解脂復膜孢酵母(亞羅解脂酵母)大鼠嗅鞘組織提取物

凋亡誘導受體PLEKHG5抗體釀酒酵母人子宮頸MatchPair: 宮頸上皮和腫瘤組織提取物
ERK抑制劑(VX-11e)紅酵母屬* 螺旋霉魏氏梭(A型)

折疊馬賽 4,4'-二氨基二苯砜β羥丁

竹喙球 氫化雙A游離氨基

球孢白僵 四溴雙A核因子E2相關因子2

哈茨木霉 S-(-)-啉-2-羧維生B12

釀酒酵母 

三葉草根瘤 2-氟-6-苯甲凝血

美澳型核果褐腐病 2-氨基-3--5-三氟抗體

緩慢葡萄球  甲基烯酰輪狀病抗體

慢生根瘤 三乙基硅烷三氟磺酯高鐵肌紅蛋白還原

香菇 2-(基硅基)噻唑環磷腺

綠粘帚霉 酰肝吸蟲IgG抗體

巴斯德畢赤酵母 4,4'-聯苯二甲肝生長因子

真姬菇 四氫芳樟球蛋白

耐久腸球 2-氨基-5--2'-氟二苯甲酮結核桿
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

 


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