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貨號	FS-X10337

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：IAP抑制劑(LCL161)

英文名稱：LCL161

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10337

產品介紹:

英文名稱：LCL161

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

LCL161是一種IAP抑制劑，在HEK293細胞中，抑制XIAP活性，IC50為35nM，在MDA-MB-231細胞中，抑制cIAP1活性，IC50為0.4nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1005342-46-0

純度：99.17%

分子量：500.63

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

層出鐮孢原變種黑色瘤相關抗原B1抗體Human MTHFD1 Ⅱ(FⅡ)

立枯絲核菌微小染色體維持缺陷蛋白5抗體Human MTHFD2(Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2) 凝血原肽段1+2(F1+2)

榆黃蘑結腸癌轉移相關蛋白1抗體Human CDK5(Cyclin-dependent kinase 5) 凝血原前體蛋白(PIVKA-II)

深色殼囊孢基質金屬蛋白-1抗體Human MTHFD1L 凝血原片段F1+2(F1+2)

蟬花磷化肌增強因子2C抗體Human MTHFS 凝血原(PT)

水生黃桿菌磷化肌增強因子2抗體Human MTHFD1L 凝血血栓調節蛋白復合物(T-TM)

皮生毛霉磷化髓鞘堿性蛋白抗體Human MTHFS 凝血受體(TR)

黑根霉磷化髓鞘堿性蛋白抗體Human MTHFD2(Methylenetetrahydrofolate dehydrogenase 2) 凝血敏感蛋白1(TSP-1)

芽殖球菌屬磷化肌球蛋白輕鏈6抗體Human OAS2(2′-5′-oligoadenylate synthase 2) 凝血抗凝血復合物(TAT)

孢小克銀漢霉輪生變種磷化p38MAPK抗體Human MRPL45 凝血(TM)

枯草芽胞桿菌磷化p38MAPK抗體Human NPPC(C-type natriuretic peptide) 凝血(Thrombin)

乳乳球菌葉蟬亞種磷化肌增強因子2C抗體Human TTR(Transthyretin) 凝溶膠蛋白(GS)

釀酒酵母磷化基末端激2抗體Human DSG1(Desmoglein-1) 凝溶膠蛋白(Gelsolin)

雜硅鹽礦物節桿菌蛋白激MPK38抗體Human MS4A6A 凝聚(CLU)

彎孢菌微粒體S轉移1抗體Human MPV17L 凝膠原蛋白(gelson)

枯草芽孢桿菌粘蛋白13抗體Human MPV17 尿腫瘤壞死因子相關誘導凋亡配體死亡受體4(TRAIL-DR4)

白地霉Geotrichum│candidum 質量規格：≥98%,美國進口膽

單核細胞增生李斯特菌Listeria│monocytogenes 質量規格：>99%龍膽苦

豬鏈球菌Streptococcus│suis 質量規格：0.99植
IAP抑制劑(LCL161)馬爾他布魯氏 3-氟鄰苯二甲酐反狀腺原

大腸埃希氏桿乙泛

傘形卷霉 3,6-二氟鄰苯二甲泛C末端水解L1

大腸埃希 4-氟苯甲酰乙甲酯芳香族L-氨基脫羧

土壤德沃斯氏 2-溴苯乙肥大類胰蛋白

居真細 N,N′-二苯基-N,N′-(3-基)-1,1′-聯苯-4,4′-二肥胖抑制

Compostimonas 6-溴吡啶-2-頻哪酯肺表面活性物質相關蛋白A

大腸埃希氏桿巰基七甘單甲肺表面活性物質相關蛋白B

諾卡氏二溴二二乙酯肺表面活性物質相關蛋白C

矩圓黑盤孢溴氟甲基膦二乙酯肺表面活性物質相關蛋白D

銅綠假單胞 1-烯基-3-甲基化咪唑分泌成分

淀粉產色鏈霉 1-乙基-3-甲基化咪唑鎓分泌型卷曲相關蛋白1

Bacillus aryabhattai 1,3-二溴-5-(易)分泌型球蛋白A

猴頭 1-乙基-3-甲基咪唑溴鹽封閉蛋白1

黃曲霉 1-丁基-3-甲基化咪唑鎓復制蛋白A
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)