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kFluor555-EdU法細胞增殖檢測試劑盒(流式)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經(jīng)銷商

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更新時間:2022-05-09 11:48:15瀏覽次數(shù):181次

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貨號 FS-X9617
kFluor555-EdU法細胞增殖檢測試劑盒(流式)正在熱銷的產(chǎn)品:乙suan激mei(ACK)測試盒 規(guī)格:100管/96樣 測試方法:微量法
乙suan激mei(ACK)測試盒 規(guī)格:50管/48樣 測試方法:紫外分光光度法
單an氧化mei測試盒 規(guī)格:100管/96樣 測試方法:微量法
單an氧化mei測試盒 規(guī)格:50管/48樣 測試方法:可見分光光度法
甜菜含量測試盒 規(guī)格

中文名稱:kFluor555-EdU法細胞增殖檢測試劑盒(流式)

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:10T|20T|50T

貨號:FS-X9617

產(chǎn)品介紹:

kFlour555 Click-iT EdU 流式檢測試劑盒,細胞增殖檢測是評估細胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎實驗手段。精確的檢測細胞增殖方法是BrdU法。EdU法檢測試劑盒是brdu方法的革命性突破。EdU(5-溴-2-脫氧尿嘧)試劑盒是一種嘧啶類似物,可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。EdU法檢測是基于“點擊"反應,一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴的原子共價反應。本試劑盒中,EdU試劑含有炔烴,而kFlour555染料試劑含有疊氮化合物。點擊法的EdU標記增殖快速有效,易于使用。只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標記出整合的EdU。標準化的固定和去污劑促滲可以使檢測試劑進入細胞,而brdu方法則需要DNA變性(如酸變性、熱變性或者用Dnase消化)去暴露BrdU,從而方便BrdU抗體結合。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

蛋白激meiD1(PRKD1)檢測試劑盒  forProteinKinaseD1(PKD1)    

晶狀體蛋白αB(CRYαB)檢測試劑盒  forCrystallinAlphaB(CRYaB)    

乙基丙二suan腦病變基因1(ETHE1)檢測試劑盒  forEthylmalonicEncephalopathy1(ETHE1)    

絲氨suan/蘇氨suan激mei11(STK11)檢測試劑盒  forSerine/ThreonineKinase11(STK11)    

160kDa核孔蛋白(NUP160)檢測試劑盒  forNucleoporin160kDa(NUP160)    

親核suα7(KPNα7)檢測試劑盒  forKaryopherinAlpha7(KPNa7)    

鯡精an激mei(DOLK)檢測試劑盒  forDolicholKinase(DOLK)    

含血管性血友病因子A域蛋白3A(vWA3A)檢測試劑盒  forVonWillebrandFactorADomainContainingProtein3A(vWA3A)    

白介su18(IL18)檢測試劑盒  forInterleukin18(IL18)    

腦蛋白44(BRP44)檢測試劑盒  forBrainProtein44(BRP44)    

TATA框結合蛋白關聯(lián)因子12(TAF12)檢測試劑盒  forTATABoxBindingProteinAssociatedFactor12(TAF12)    

突觸囊泡蛋白Ⅴ(SYT5)檢測試劑盒  forSynaptotagminV(SYT5)    

組蛋白H2B(H2B)檢測試劑盒  forHistoneH2B(H2B)    

高分子量激肽原(HMWK)檢測試劑盒  forHighMolecularWeightKininogen(HMWK)    

破骨細胞關聯(lián)受體(OSCAR)檢測試劑盒  forOsteoclastAssociatedReceptor(OSCAR)    

Smad同源物7(Smad7)檢測試劑盒  forMothersAgainstDecapentaplegicHomolog7(Smad7)    

巨噬細胞集落刺激因子(MCSF)檢測試劑盒  forColonyStimulatingFactor1,Macrophage(MCSF)    
kFluor555-EdU法細胞增殖檢測試劑盒(流式)標準品  規(guī)格:250mg  英文名稱:Cocaine Hydrochloride CII

標準品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Methocarbamol

mi托擔標準品  規(guī)格:500mg  英文名稱:Mitotane

雌酚tong標準品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Estrone

suan標準品  規(guī)格:50mg  英文名稱:

N-乙基標準品  規(guī)格:0.5ml  英文名稱:N-Ethylpiperazine

lv霉su棕櫚suan酯標準品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Chloramphenicol Palmitate

無味lv霉suA晶型標準品  規(guī)格:200mg  英文名稱:

lv霉suA多晶型標準品  規(guī)格:100mg  英文名稱:

去乙?;Z孕酯標準品  規(guī)格:25mg  英文名稱:Deacetylnorgestimate

 


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