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貨號 | FS-X10782 |
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中文名稱:Hsp90抑制劑(AT13387)
英文名稱:AT13387
產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10782
產品介紹:
AT13387是Hsp90抑制劑,對A375細胞的IC50為18nM,具有長效的抗腫瘤活性。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:912999-49-6 別名:Onalespib 純度:99.64% 分子量:409.52 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
大腸埃希氏菌兔子堿性成纖維生長因子Anti-LDLRAD3 Antibody人型肝炎IgG(HCV-IgG)
Marella suaedae人結締組織活化肽ⅢAnti-LGALS2 Antibody人型肝炎IgG(HCV-IgG)
玫瑰小雙孢菌大鼠白介7Anti-LEF1 Antibody人糖蛋白130(gp130)
釀酒酵母人巨噬集落激因子受體Anti-LEFTY1 Antibody人糖蛋白130(gp130)
金黃回旋鏈霉菌兔子前列腺E2Anti-LFNG Antibody人促腎上腺皮質激釋放因子(CRF)
熱紫鏈霉菌不滲透亞種魚促卵泡Anti-LFNG Antibody人促腎上腺皮質激釋放因子(CRF)
核桃殼囊孢菌小鼠β-防御Anti-LGALS7 Antibody人去加壓/1-去基-8-右旋-精加壓(dDAVP)
多形布勒擔子酵母凋亡原位(我公提供代測服務)Anti-LGALS8 Antibody人去加壓/1-去基-8-右旋-精加壓(dDAVP)
香菇(L988)大鼠絲/蘇蛋白磷Anti-LGALS9 Antibody人蕈堿型乙酰受體亞型M3(M-AChR M3)
地衣芽孢桿菌魚促黃體激Anti-LHCGR Antibody人蕈堿型乙酰受體亞型M3(M-AChR M3)
盤長孢狀盤孢小鼠Ⅰ型膠原交聯羧基末端肽Anti-LIG3 Antibody人睪受體(TR)
蠟蚧菌A Fc段受體ⅠAnti-LILRA1 Antibody人睪受體(TR)
IBV M41 HAR/HI serum 陽性血清(荷蘭引進)兔子5羥色Anti-LIG4 Antibody人蕈堿型乙酰受體(M-AChR)
間型串珠鐮孢兔子β內啡肽Anti-LILRA2 Antibody人蕈堿型乙酰受體(M-AChR)
昆明鏈霉菌小鼠神經絲蛋白Anti-LILRA4 Antibody人糖蛋白49A(Gp49a)
蘇云金芽孢桿菌蘇云金亞種魚磷化腺活化蛋白激Anti-LILRA5 Antibody人糖蛋白49A(Gp49a)
結合蛋白1抗體克魯斯假絲酵母小鼠肺腺癌細胞系
環指蛋白5抗體E3泛蛋白連接RNF5綠色鏈霉菌人肺癌細胞
核糖體蛋白L15抗體地生翅孢殼昆蟲細胞
核糖體蛋白L19抗體奇異翅孢殼鼠黑色瘤細胞
Hsp90抑制劑(AT13387)紫云英根瘤 Stuart運送培養基管松弛
宇佐美曲霉 安息香二甲(DMPA)髓過氧化物
凍膠假絲酵母 Amies運送培養基管髓磷脂堿性蛋白
柔嫩艾美耳球蟲 瓷珠種保存管(20支)髓鞘堿性蛋白抗體
枯草芽孢桿 瓷珠種保存管(50支)胎盤生長因子
羅倫隱球酵母羅倫變種 PH6.8磷鹽緩沖液糖聚糖
空腸彎曲桿 6-甲基-1-茚酮天冬蛋白
大腸埃希氏桿 PH7.0的NaCl蛋白胨緩沖液天門冬氨基轉移
大腸埃希氏桿 0.1%蛋白胨水同型半胱
芽枝狀枝孢 含200ml鹽水均質袋透明質
弗雷德里克斯堡假單胞 含200ml鹽水均質袋晚期糖基化終末產物受體
拉曼被孢霉 L-苯芐酯鹽鹽胃泌
南方散斑殼 含225ml布氏肉湯均質袋間粘附分子1
長枝木霉 含22%胰酪胨大豆肉湯均質袋細脂蛋白
腸桿 含50ml7.5%肉湯均質袋纖連蛋白
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