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貨號	FS-X10593

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：PI3K抑制劑(GSK2126458)

英文名稱：GSK2126458

產品規格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10593

產品介紹:

GSK2126458是一種高選擇性，有效的PI3K抑制劑，抑制p110α/β/δ/γ，mTORC1/2的活性，Ki值分別為0.019nM/0.13nM/0.024nM/0.06nM和0.18nM/0.3nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1086062-66-9

別名：Omipalisib

純度：99.31%

分子量：505.5

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

谷棒桿菌分泌型白蛋白抑制因子抗體Anti-PRDX4 Antibody接觸蛋白3(CNTN3)

紙葡萄穗霉2，4-二氧乙(除草劑)單克抗體Anti-PRDX4 Antibody(PB0416)接觸蛋白2(CNTN2)

曲霉尿轉運型糖蛋白抗體Anti-PRDX3 Antibody(PB0349)接觸蛋白1(CNTN1)

美澳型核果褐腐病菌雌激誘導的轉錄調制器抗體Anti-PRDX5 Antibody酵母脫氫(SCCPDH)

短桿狀馬賽菌14-3-3蛋白/14-3-3 α/β/γ/δ/ε亞型抗體Anti-PRDX5 Antibody(PB0417)窖蛋白3(CAV3)

南非諾卡氏菌2，4-二氧乙(除草劑)抗體Anti-PRF1 Antibody窖蛋白2(CAV2)

乳球菌屬5-羥色受體1A抗體Anti-PRDX6 Antibody(PB0350)窖蛋白(CAV1)

擬無枝菌5羥色抗體Anti-PRG2 Antibody角質轉谷酰(TGM1)

泡盛曲霉5-羥色受體1B抗體Anti-PREB Antibody角鯊烯單加氧(SQLE)

黑曲霉神經突觸2抗體Anti-PRKAB1 Antibody角膜蛋白(KERA)

熒光假單胞菌環指蛋白142抗體Anti-PRKAA1 Antibody角化粒(CDSN)

樹舌靈芝突觸結合蛋白3抗體Anti-PRKAB2 Antibody角化蛋白(CNFN)

蘇云金芽孢桿菌突觸相關蛋白25抗體Anti-PRKAR1A Antibody角化不良蛋白(DKC)

鐮刀菌因子信號傳導抑制蛋白1抗體Anti-PRKCA Antibody角蛋白9(KRT9)

枯草芽孢桿菌超氧化物歧化1抗體(銅/鋅過氧化物歧化SOD)Anti-PRKCB Antibody角蛋白81(KRT81)

蟻巢傘屬超氧化物歧化2抗體Anti-PRKCA Antibody角蛋白8(KRT8)

神經肽S受體1/G蛋白偶聯受體154抗體Microlunatusphosphovorus小鼠腎動脈內皮細胞提取物

神經調節肽S抗體蜂房類芽孢桿菌小鼠膀胱成纖維細胞提取物

分子生物鐘調控蛋白NOC抗體唐菖蒲伯克霍爾德菌小鼠前列腺上皮細胞提取物

核受體0相關蛋白B家族2抗體變化考克氏菌小鼠膀胱上皮細胞提取物
PI3K抑制劑(GSK2126458)赭色栓 5-溴-2-甲氧基吡啶錳超氧化物歧化

枯草芽胞桿枯草亞種 3,5-二溴-2-羥基吡啶含錳核糖核還原

田無鏈霉 2-羥基-5-吡啶精

谷棒桿 2-甲氧基-3,5-二溴吡啶甘油二酯

頭狀禿馬勃化釔雙核精

綠黃鏈霉 2-羥基-4-脂多糖；內

Aeromonas aquariorum 3--2-羥基吡啶磷化MEK1;2

林生毛霉硫釤(III)，八水合物磷化外信號調節激

美澳型核果褐腐病化釤,六水磷化絲裂原活化蛋白激1

密歇根棍狀桿標記亞種溴化鎘,四水磷化真核起始因子結合蛋白1

甜菜慢生根瘤硫銦磷化含ETS域Elk1蛋白

枯草芽孢桿化鎳磷化外信號調節激1;2

枯草芽胞桿枯草亞種溴化鎳磷化絲裂原活化蛋白激
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)