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貨號 | FS-X10244 |
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中文名稱:H-89(PKA抑制劑)
英文名稱:
產品規格:1mg|5mg
貨號:FS-X10244
產品介紹:
英文名稱: 產品規格:1mg|5mg H89 2HCl 是一種有效的PKA 抑制劑,Ki 為48 nM,作用于PKA 比作用于PKG 選擇性高10倍,比作用于PKC, MLCK,鈣調蛋白激酶II 和酪蛋白激I/II 選擇性高500倍。 |
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
密歇根克雷伯氏菌滋養層抗原3β7抗體Human SLC16A12 大鼠D-乳免疫試劑盒
平田頭菇熱休克蛋白-22抗體Human SLC16A3 大鼠D-甘油3-磷免疫試劑盒
硒砷芽孢桿菌組織H4受體抗體Human SLC16A2 大鼠D二聚體(D2D)免疫試劑盒
裴氏著色霉羥基類固脫氫11β2抗體Human SLAMF7 大鼠DNA甲基轉移1(DNMT1)免疫試劑盒
釀酒酵母組織H3受體抗體Human SLC10A3 大鼠C型鈉尿肽(CNP)免疫試劑盒
瑞山海源菌磷化組蛋白H1抗體Human SLC12A2(Solute carrier family 12 member 2) 大鼠C肽(C-Peptide)免疫試劑盒
圍小叢殼扁圓變種HEATR4蛋白抗體Human SLC12A4 大鼠C反應蛋白(CRP)免疫試劑盒
栗疫菌透明質及粘蛋白1抗體Human SIX4 大鼠CXC趨化因子受體5(CXCR5)免疫試劑盒
新城疫病轉錄因子HES7抗體Human SIX2 大鼠CXC趨化因子受體4(CXCR4)免疫試劑盒
尖鐮孢古巴?;蛯m頸黏液蛋白相關蛋白抗體Human SLC13A4 大鼠CXC趨化因子配體16(CXCL16)免疫試劑盒
玫瑰色紅球菌流感病H3N8血凝抗體Human SKAP2 大鼠c-ros致癌基因1,受體酪激(ROS1)免疫試劑盒
運動節桿菌流感病H3N7血凝抗體Human SIX5 大鼠Coronin-1A(Coro1a/Coro1)免疫試劑盒
Rhizobium multihospitium流感病H3N1血凝抗體Human SKIL 大鼠c-jun 免疫試劑盒
黑曲霉同源盒蛋白HoxB3抗體Human SIX4 大鼠c-fos 免疫試劑盒
產氣莢膜梭菌 D型遺傳性血色病蛋白相關蛋白1抗體Human SIX5 大鼠CDP-甘油二酯--甘油-3-磷3磷脂酰轉移,線粒體(PGS1)免疫試劑盒
紋黑蛋巢甘油吸收/轉運蛋白GUP1抗體Human SKAP2 大鼠CDCP1 免疫試劑盒
涅斯捷連科氏菌Nesterenkonia│sp. 質量規格:10μg/ml,u=4%科羅索
枯草芽孢桿菌Bacillus│subtilis (Ehrenberg) Cohn 質量規格:分析標準品,99%草質
芽孢桿菌屬Bacillus│sp. 質量規格:分析標準品,97.5%異鼠李-3-O-葡萄糖
H-89(PKA抑制劑)枯草芽胞桿 3-氨基-4-氟甲酯ERp57
枯草芽孢桿 2-氟脂褐
大孢鏈霉 5-降烯-2,3-二羧一甲酯心型脂肪結合蛋白
近弧狀短波單胞 鉛(II)BPDE-DNA加合物
根瘤 1--3-乙氧基烷周期依賴性激2
秦氏蜜環 順-4-氨基環己烷甲可溶性β淀粉樣蛋白
鏈球屬 4-氨基-3-溴喹啉不可溶性β淀粉樣蛋白
艱難鏈霉 3-氧代-3,4-二氫-2-喹喔啉甲乙酯雷帕霉靶蛋白
紅球 4-氨基鄰苯二甲酰亞單氧化B
大腸埃希 4-氟-1,2-苯二腸道病71型IgG抗體
唐菖蒲伯克霍爾德氏 6--1,2,3,4-四氫咔唑蛋白酪磷抗體
尾孢屬 2--3,5-二氟苯甘油磷
釀酒酵母 3-氨基-5-甲基己過氧化氫
小鏈霉(小諾卡氏) N-(2,3,4-三氟苯)乙酰苯抗雙鏈DNA-IgG抗體
總狀橫梗霉 陽離子桃紅FG抗雙鏈DNA-IgM抗體
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