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TGF-βRI抑制劑(ALK5抑制劑)(SD-208)

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更新時間:2022-05-23 15:06:06瀏覽次數(shù):212次

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貨號 FS-X10851
TGF-βRI抑制劑(ALK5抑制劑)(SD-208)正在熱銷的產(chǎn)品:HAMA(Human antimous antibody) ELISA 人抗鼠抗體 分子生物學(xué), ≥99.8%
VGCC(Human voltage-gated calcium channel) ELISA Kit 人鈣離子通道抗體 GR,99.8%
BrdU(Human Bromodeoxyuridine) ELISA K

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱:TGF-βRI抑制劑(ALK5抑制劑)(SD-208)

英文名稱:SD-208

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號:FS-X10851

產(chǎn)品介紹:

SD-208是一種選擇性的TGF-βRI(ALK5)抑制劑,IC50值為48nM,對其選擇性是對TGF-βRII的10倍。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:627536-09-8

純度:98.33%

分子量:352.75

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

雕刻擬盤多毛孢大鼠Ⅷ相關(guān)抗原Anti-POLA1 Antibody人血管舒緩激肽(BK)

奇異球菌屬大鼠IXAnti-Pogz Antibody人血管舒緩激肽(BK)

海水甲基桿菌小鼠碳酐Anti-POLB Antibody人肌球蛋白輕鏈(MLC)

高盧蜜環(huán)菌人P53Anti-POLB Antibody人肌球蛋白輕鏈(MLC)

千葉鏈霉菌人周期D3Anti-POLD1 Antibody人α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)

釀酒酵母大鼠ⅩAnti-POLD3 Antibody人α-輔肌動蛋白3(ACTN-3)

郝氏鏈霉菌小鼠降鈣基因相關(guān)肽Anti-POLD3 Antibody人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)

香菇8人周期D2Anti-POLDIP3 Antibody人超敏C反應(yīng)蛋白(hs-CRP)

松杉靈芝小鼠胃動Anti-POLE Antibody人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)

苜蓿中華根瘤菌大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子Anti-POLE Antibody人肌鈣蛋白Ⅰ(Tn-Ⅰ)

芹側(cè)耳大鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物Anti-POLG2 Antibody人血清淀粉樣蛋白A(SAA)

假堅強(qiáng)芽孢桿菌小鼠生長抑Anti-POLE4 Antibody人血清淀粉樣蛋白A(SAA)

鏈霉菌人周期D1Anti-POLK Antibody人熱休克蛋白60(Hsp-60)

釀酒酵母人內(nèi)皮抑Anti-POLI Antibody人熱休克蛋白60(Hsp-60)

紅蠟盤菌小鼠血纖蛋白原Anti-POLR1B Antibody人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)

芽孢桿菌大鼠凝血抗凝血復(fù)合物Anti-POLQ Antibody人熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)

轉(zhuǎn)化性卷曲含蛋白質(zhì)2地錘菌屬人青光眼小梁網(wǎng)細(xì)胞

微管相關(guān)同源蛋白TPX2抗體茄腐皮鐮刀菌大鼠視網(wǎng)膜微血管內(nèi)皮細(xì)胞

腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)蛋白5褐赤刺革菌人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞

腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白2TNFα-IP2抗體肉座菌屬人皮膚鱗癌細(xì)胞
TGF-βRI抑制劑(ALK5抑制劑)(SD-208)硬結(jié)節(jié)桿 RaKa-Ray培養(yǎng)基葡萄糖依賴性胰島釋放多肽

蛇孢霉屬 3-氨基-4-基吡唑葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2

發(fā)酵畢赤酵母 HC瓊脂基礎(chǔ)前列環(huán)

冬蟲夏草 改良LETHEEN瓊脂基礎(chǔ)前列腺E2

*林肯鏈霉 [2-[2-(Fmoc-氨基)乙氧基]乙氧基]乙羥甲基戊二單酰

金黃色葡萄球金黃亞種 TAT肉湯熱休克蛋白20

檸檬色游動球 YNB培養(yǎng)基熱休克蛋白70

葉點霉屬 去氧膽鹽枸櫞鹽瓊脂乳鐵蛋白

乳桿屬 3,4,7,8-四甲基-1,-菲羅啉狀腺原

柔嫩艾美耳球蟲 葡萄球選擇性瓊脂1三葉因子3

羅丹塞伯林德納氏酵母 甘露卵黃培養(yǎng)基基礎(chǔ)色上皮衍生因子

粉紅寄生 改良Giolitti-Cantobi肉湯腎上腺

香菇 (R)-(+)-碳烯酯生長分化因子9

雙氮纖維單胞 TMP瓊脂培養(yǎng)基生長

變天藍(lán)鏈霉 EF-18瓊脂生長釋放肽
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

 


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