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貨號(hào)	FS-X9604

中文名稱(chēng)：細(xì)胞活力快速檢測(cè)試劑盒(Luminescent)

英文名稱(chēng)：

產(chǎn)品規(guī)格：500T

貨號(hào)：FS-X9604

產(chǎn)品介紹:

本試劑盒是通過(guò)對(duì)ATP 進(jìn)行定量測(cè)定來(lái)檢測(cè)培養(yǎng)物中活細(xì)胞數(shù)目的一種均質(zhì)檢測(cè)方法。ATP 是活細(xì)胞新陳代謝的一個(gè)指標(biāo)。細(xì)胞活力快速檢測(cè)試劑盒為多孔板而設(shè)計(jì)，是進(jìn)行自動(dòng)化高通量篩選(HTS)、細(xì)胞增殖和毒性分析的理想選擇。均質(zhì)檢測(cè)步驟就是將單一試劑直接加入含有血清的培養(yǎng)細(xì)胞中，無(wú)需洗滌細(xì)胞、去除培養(yǎng)基或進(jìn)行多步加樣操作。在384 孔板上，加入試劑并混合后，10 分鐘內(nèi)，該系統(tǒng)可檢測(cè)到的每個(gè)孔內(nèi)的細(xì)胞數(shù)為15 個(gè)。

均質(zhì)檢測(cè)的" 加樣-混合-檢測(cè)" 的操作方案使得細(xì)胞裂解和產(chǎn)生的發(fā)光信號(hào)與存在ATP 量成正比，而ATP 量直接與培養(yǎng)物中的細(xì)胞數(shù)量成正比。細(xì)胞活力快速檢測(cè)試劑盒產(chǎn)生一種"輝光型" 的發(fā)光信號(hào)，半衰期一般大于5 小時(shí)，因細(xì)胞類(lèi)型和培養(yǎng)基而異。由于信號(hào)半衰期長(zhǎng)，不需要使用試劑自動(dòng)進(jìn)樣器，就可靈活地進(jìn)行連續(xù)的或批量的多孔板處理。*的均質(zhì)檢測(cè)方案避免了那些需要多個(gè)步驟的ATP 檢測(cè)方法可能會(huì)引入的誤差。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

磷suanmeiPP2A癌性抑制物(CIP2A)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CIP2A ELISA Kit，CIP2A，

類(lèi)白細(xì)胞抗原G(HLA-G)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：HLA-G ELISA Kit，HLA-G，

可溶性核因子κB受體活化因子(sRANK)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：sRANK ELISA Kit，sRANK，

人抗異質(zhì)型核糖核蛋白抗體/抗RA33抗體(anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab ELISA Kit，anti-hnRNP-ab/anti-RA33-ab，

人抗染色體抗體(anti-chromosome Ab)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：anti-chromosome Ab ELISA Kit，anti-chromosome Ab，

血小板衍化生長(zhǎng)因子(PDGF)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：PDGF ELISA Kit，PDGF，

血管緊張suⅡ受體2(AT2R)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：AT2R ELISA Kit，AT2R，

血紅su加氧mei(HO)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：HO ELISA Kit，HO，

鋅轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6(ZnT6)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：ZnT6 ELISA Kit，ZnT6，

纖溶mei原激活物抑制因子1(PAI-1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：PAI-1 ELISA Kit，PAI-1，

細(xì)胞毒su相關(guān)蛋白A(CagA)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CagA ELISA Kit，CagA，

維生suC(VC)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：VC ELISA Kit，VC，

同型半胱氨suan(Hcy)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：Hcy ELISA Kit，Hcy，

mei3(CA3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CA3 ELISA Kit，CA3，

suan性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子1(aFGF-1)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：aFGF-1 ELISA Kit，aFGF-1，

嗜suan性白血球相關(guān)之RNA水解酵su家族成員3(EAR3)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：EAR3 ELISA Kit，EAR3，

CytospinB蛋白(CYTSB)elisa檢測(cè)試劑盒英文名稱(chēng)：CYTSB ELISA Kit，CYTSB，
細(xì)胞活力快速檢測(cè)試劑盒(Luminescent)D-(-)-果糖標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:125mg 英文名稱(chēng)：Fructose

相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱(chēng)：Modafinil Related Compound D

乙酰丙suan鈣標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:1g 英文名稱(chēng)：Calcium Levulinate (AS)

抗壞血suan鈣標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng)：Calcium Ascorbate

馬來(lái)suanjia麥角新標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:50mg 英文名稱(chēng)：

異戊巴比CII標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng)：Amobarbital CII

ben妥英標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:200mg 英文名稱(chēng)：

潑尼卡酯相關(guān)物質(zhì)C標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:20mg 英文名稱(chēng)：

相關(guān)物質(zhì)D標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:30mg 英文名稱(chēng)：

鹽suan烯丙標(biāo)準(zhǔn)品規(guī)格:250mg 英文名稱(chēng)：Nalorphine Hydrochloride CIII