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貨號	FS-X10950

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：PRMT4和PRMT6雙重抑制劑(MS049)

英文名稱：MS049

產品規格：1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10950

產品介紹:

MS049是一個強的，有選擇性的，有細胞活性的PRMT4和PRMT6雙重抑制劑，IC50分別是34nM和43nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：1502816-23-0

純度：98.0%

分子量：248.36

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

黑曲霉人上皮中性?；罨?/span>78Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠肺表面活性物質相關蛋白A(SP-A)

檸條根瘤菌人維生CBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠克拉拉蛋白(CC16)

葡萄枯萎病菌人維生B6Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠克拉拉蛋白(CC16)

冷溫木拉克酵母人可溶性P選擇Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β半乳糖(βGAL)

少根根霉人基質金屬蛋白抑制因子1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β半乳糖(βGAL)

小球狀少鹽芽孢桿菌人維生DBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠腎上腺(EPI)

石楠盤多毛孢人維生K1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠腎上腺(EPI)

酒紅鏈霉菌人維生B12Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β甘露糖(β Manase)

大腸埃希氏菌人維生D3Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β甘露糖(β Manase)

東方伊薩酵母人維生D2Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠髓過氧化物特異性抗中性粒胞質抗體IgG(MPO-ANCA IgG)

運動節桿菌人維生EBacillus subtilis subsp. subtilis小鼠髓過氧化物特異性抗中性粒胞質抗體IgG(MPO-ANCA IgG)

栗疫菌人維生ABacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β內酰抑制劑(BLI)

磚紅鏈霉菌人鳥交換因子Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β內酰抑制劑(BLI)

蒙地曲霉人維生D受體Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠一氧化氮(NO)

枯草芽孢桿菌人性休克綜合征1Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠一氧化氮(NO)

淡水噬冷菌人金葡菌腸Bacillus subtilis subsp. subtilis小鼠β萘(β-Nph)

鋅指蛋白ZBTB12抗體脆泊氏孔菌轉PYTL基因小鼠睪丸支持細胞

鋅指蛋白924抗體粗柄蘑菇人胚胎心臟成纖維樣細胞

鋅指蛋白297抗體杯傘正常人胰管上皮細胞

鋅指蛋白23抗體斜蓋傘中國地鼠卵巢細胞-木糖基轉移I缺陷型
PRMT4和PRMT6雙重抑制劑(MS049)紫杉薄孔二苯烷肉堿棕櫚酰基轉移1α

擬青霉季戊四腺環化

擬莖點霉四氫糠轉甲狀腺蛋白

鴨疫里氏桿透胰凝乳蛋白

白被黑蛋巢 1-辛膠原吡啶交聯

球毛殼正庚雙A

枯草芽孢桿環己白三烯B4

平菇十六葉黃

鐮刀十八胡蘿卜

蘇云金芽孢桿肯尼亞亞種 2-壬二酰

黑曲霉 1-壬胰凝乳蛋白

鏈格孢苯甲游離轉甲狀腺蛋白

波羅的海西瓦氏 3-苯肉堿脂酰轉移

曲霉 2-苯乙色P450 19A1B

*匍枝根霉 2,4,6-基吡啶S轉移
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)