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| 貨號 | FS-X9539 |
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中文名稱：Caspase 1 活性檢測試劑盒
英文名稱：Caspase 1 Activity Assay Kit
產品規格：20次|100次
貨號：FS-X9539
產品介紹:
本試劑盒是采用分光光度法檢測細胞或組織裂解液中caspase 1酶活性或純化的caspase 1酶活性的試劑盒。本試劑盒用酶標儀檢測或容量不超過100μl的分光光度檢測杯檢測時，除標準曲線外可以檢測20個樣品。 試劑盒組分： 裂解液——————8ml 檢測緩沖液——————8ml Ac-YVAD-pNA(2mM)———200μl pNA(10mM)——————200μl Caspase是一個在細胞凋亡過程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase 1也稱interkeukin 1b conberting enzyme(ICE)，有時被寫作caspase-1或caspase 1，是caspase家族中可以剪切IL-1b前體蛋白或IL-18前體產生相應成熟的細胞因子的caspase。Caspase 11可以剪切45kD的caspase 1前體蛋白，產生20kD和10kD的片段，這兩個片段可以形成異源二聚體(heterodimer)，并進一步由兩個異源二聚體形成四聚體。Caspase 1可以通過剪切其凋亡Bcl-XL來調節細胞凋亡，并通過其對一些細胞因子前體的剪切來調控相關免疫反應。 本caspase 1活性檢測試劑盒是基于caspase 1可以催化底物Ac-YVAD-pNA(acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp p-nitroanilide)產生黃色的pNA(p-nitroaniline)，從而可以通過測定吸光度來檢測caspase 1的活性。pNA在405nm附近有強吸收。 試劑盒中提供了caspase 1催化產生的黃色產物pNA，可以作為定量caspase 1酶活性的標準品。 儲存條件：-20℃。 |
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
中性內肽mei/腦啡肽mei(NEP)elisa檢測試劑盒 英文名稱：NEP ELISA Kit，NEP，
原纖維蛋白-1(FBN1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：FBN1 ELISA Kit，FBN1，
整合suα2(ITGA2)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ITGA2 ELISA Kit，ITGA2，
異質性胞核核糖核蛋白A3(hnRNP A3)elisa檢測試劑盒 英文名稱：hnRNP A3 ELISA Kit，hnRNP A3，
胰島su樣生長因子結合蛋1(IGFBP-1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：IGFBP-1 ELISA Kit，IGFBP-1，
血小板因子3(PF-3)elisa檢測試劑盒 英文名稱：PF-3 ELISA Kit，PF-3，
血漿酯轉移蛋白(CETP)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CETP ELISA Kit，CETP，
血管緊張肽meiA(ATA)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ATA ELISA Kit，ATA，
信號傳導子及轉錄激活子3(STAT3)elisa檢測試劑盒 英文名稱：STAT3 ELISA Kit，STAT3，
纖維蛋白原α鏈(FGA)elisa檢測試劑盒 英文名稱：FGA ELISA Kit，FGA，
細胞角蛋白13(CK-13)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CK-13 ELISA Kit，CK-13，
Nicalin蛋白(NCLN)elisa檢測試劑盒 英文名稱：NCLN ELISA Kit，NCLN，
Ki-67蛋白(Ki67P)elisa檢測試劑盒 英文名稱：Ki67P ELISA Kit，Ki67P，
Mg2+/Mn2+依賴性蛋白磷suanmei1A(PPM1A)elisa檢測試劑盒 英文名稱：PPM1A ELISA Kit，PPM1A，
G蛋白偶聯受體78(GPR78)elisa檢測試劑盒 英文名稱：GPR78 ELISA Kit，GPR78，
ER脂質Raft關聯蛋白1(ERLIN1)elisa檢測試劑盒 英文名稱：ERLIN1 ELISA Kit，ERLIN1，
C-型凝集su域家族4成員K(CLEC4K)elisa檢測試劑盒 英文名稱：CLEC4K ELISA Kit，CLEC4K，
Caspase 1 活性檢測試劑盒奧美拉zuo相關物質A標準品 規格:15mg 英文名稱：
蒿jia醚相關物質B標準品 規格:15mg 英文名稱：
琥酯標準品 規格:200mg 英文名稱：Artesunate
2-叔丁基-4-羥基茴香醚標準品 規格:200mg 英文名稱：2-tert-Butyl-4-hydroxyanisole
普羅帕tong相關物質B標準品 規格:50mg 英文名稱：Propafenone Related Compound B
鄰jiaben磺酰an標準品 規格:200mg 英文名稱：o-Toluenesulfonamide
辛基三嗪tong標準品 規格:200mg 英文名稱：Ethylhexyl Triazone
木糖chun標準品 規格:1g 英文名稱：Xylitol
肌chun標準品 規格:500mg 英文名稱：Inositol
塔格糖標準品 規格:200mg 英文名稱：Tagatose
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