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CDK抑制劑

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-23 14:58:01瀏覽次數(shù):216次

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貨號 FS-X10835
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Alpha-SCA(Human Alph

中文名稱:CDK抑制劑

英文名稱:AT7519 Hydrochloride

產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號:FS-X10835

產(chǎn)品介紹:

AT7519 Hydrochloride是一種有效的CDK抑制劑,對CDK1,CDK2,CDK4-CDK6以及CDK9的IC50值分別為210,47,100,13,170和<10nM。

注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途!

號:902135-91-5

純度:98.90%

分子量:418.71

儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

川黃桿菌小鼠ⅩAnti-PHF1 Antibody人黏著斑激(FAK)

畢赤酵母屬人角蛋白17Anti-PHF3 Antibody人黏著斑激(FAK)

傳染性支氣管炎病大鼠糖皮質(zhì)類固受體Anti-PGLS Antibody人可溶性磷脂A2(sPL-A2)

解橡膠諾卡氏菌大鼠黃體生成釋放激Anti-PHAX Antibody人可溶性磷脂A2(sPL-A2)

糙皮側(cè)耳人制瘤M受體Anti-PHF3 Antibody人脫氧核糖核Ⅰ(DNase-Ⅰ)

乳酒假絲酵母小鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉輔因子Anti-PHKB Antibody人脫氧核糖核Ⅰ(DNase-Ⅰ)

鞘脂菌小鼠前心鈉肽Anti-PHKA1 Antibody人精(Arg)

黃曲霉大鼠8異前列腺Anti-PHKG1 Antibody人精(Arg)

嗜湖短芽胞桿菌人B淋巴瘤因子3Anti-PHLDA1 Antibody人精(Arg)

香栓孔菌人癌蛋白誘導(dǎo)轉(zhuǎn)錄物3Anti-PHLPP1 Antibody人精(Arg)

Megamonas funiformis小鼠N端前腦鈉Anti-Phospho AATF (Ser477) Antibody堿性磷(NAP)

多粘類芽孢桿菌大鼠γ干擾誘導(dǎo)蛋白16/p16Anti-Phospho ABL1 (Tyr393/439) Antibody堿性磷(NAP)

中國臺灣根霉人P27蛋白Anti-Phospho ACO1 (Ser711) Antibody人間變性淋巴瘤激(ALK)

堅強(qiáng)芽孢桿菌小鼠纖溶抗纖溶復(fù)合物Anti-Phospho AKT1 (Thr342) Antibody人間變性淋巴瘤激(ALK)

嗜碳芽孢桿菌大鼠基質(zhì)衍生因子1aAnti-Phospho ALOX5 (Ser523) Antibody人激動異構(gòu)/分裂MB(CKMB)

蝙蝠蛾擬青霉大鼠血漿α顆粒膜蛋白Anti-Phospho ANAPC1 (S355) Antibody人激動異構(gòu)/分裂MB(CKMB)

環(huán)指蛋白94抗體蓋囊菇小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤細(xì)胞

G蛋白偶聯(lián)誘導(dǎo)蛋白2受體抗體粘孢白僵菌大鼠回腸細(xì)胞

腺泡狀軟組織肉瘤結(jié)構(gòu)域蛋白ASPC抗體黃毛黎豆根瘤菌人子宮頸內(nèi)膜上皮細(xì)胞

轉(zhuǎn)錄共激活因子TAZ抗體藤黃檀根瘤菌人慢性髓樣白血病細(xì)胞
CDK抑制劑傷口諾卡氏 百清腎上腺

蘭鏈霉 百清乙型肝炎病核心抗原

粘滑菇屬 四對苯二甲肌

松口蘑 N,N-二甲基乙酰二甲基縮細(xì)小病抗體

黑曲霉 鄰氨基苯肌激同工MB

根霉 L-2,4-二氨基丁酮激M2

香港洛克氏 4-甲氧基茴香硫糖原磷化同工BB

吉氏根瘤 2,4-二甲基-6-叔丁基皮質(zhì)類固11β脫氫同工1

大腸埃希氏 4-苯氧基乙空腸彎曲

伍氏束縛 3-二磷腺

根瘤屬 3-溴戊烷脂聯(lián)

烏斯懷亞海單胞 2,6-二氟苯甲酰性脂肪

雞早熟艾美爾球蟲(LZ株) (+)-2,2'-[(3aR,8aS)-3a,8a-二氫-8H-茚苯[1,2-d]并惡唑中性脂肪

絳紅鏈霉 1,2-二(二甲硅基)苯白介1β

拜耳接合酵母 N-乙酰-D-纈鈣調(diào)蛋白

 


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