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貨號	FS-X10833

培養操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；

5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：HDAC抑制劑(Dacinostat)

英文名稱：Dacinostat

產品規格：1mL(10mM)|10mg|50mg

貨號：FS-X10833

產品介紹:

Dacinostat是一種有效的HDAC抑制劑，IC50值為32nM；同時可抑制HDAC1的活性，IC50值為9nM，主要用于癌癥研究。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！

號：404951-53-7

別名：NVP-LAQ824;LAQ824

純度：97.23%

分子量：379.45

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；

5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

球孢枝孢人C型鈉尿肽Anti-PDRG1 Antibody人多形核白彈性蛋白(PMN Elastase)

Sphingobium大鼠氧化低密度脂蛋白抗體Anti-PDXDC1 Antibody人多形核白彈性蛋白(PMN Elastase)

少根根霉人阿立新AAnti-PEAK1 Antibody人尿激型纖溶原激活物(uPA/PLAU)

Bacillus safensis小鼠色上皮衍生因子Anti-PECAM1 Antibody人尿激型纖溶原激活物(uPA/PLAU)

德假單胞菌大鼠抗平滑肌抗體Anti-PDZD2 Antibody人激肽釋放8(KLK 8)

托姆青霉大鼠核因子κB亞基p65親和肽Anti-PEG3 Antibody人激肽釋放8(KLK 8)

癬囊腔菌小鼠解整合樣金屬蛋白8Anti-PER3 Antibody人激肽釋放6(KLK 6)

蘇云金桿菌武漢亞種人神經肽YAnti-Pepsin A Antibody人激肽釋放6(KLK 6)

臭曲霉蒼白變種小鼠抗Anti-Peripherin 1 Antibody人果糖1,6二磷縮(FDA)

黃柄曲霉人腦腸肽Anti-PEX Antibody人果糖1,6二磷縮(FDA)

鴨疫里氏桿菌大鼠纖溶抑制因子/凝血激活的纖溶抑制物Anti-PEX11B Antibody人組織蛋白D(cath-D)

黏液桿菌人乙酰Anti-PEX11G Antibody人組織蛋白D(cath-D)

網狀鐮孢大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢaAnti-PEX19 Antibody人激敏感性脂肪(HSL)

可可乳桿菌小鼠胰島抗體Anti-PEX14 Antibody人激敏感性脂肪(HSL)

大腸埃希氏菌大鼠血小板反應蛋白/凝血敏感蛋白1Anti-PEX14 Antibody人胰激肽原(PK)

藤黃微球菌人腦鈉/腦鈉尿肽Anti-PEX2 Antibody人胰激肽原(PK)

磷化血管生成受體2抗體*粗柄白蘑C3H小鼠骨肉瘤細胞

轉錄因子TBX6抗體美澳型核果褐腐病菌正常腎臟上皮細胞

分子伴侶復合體TCP-1α抗體頭孢霉屬小鼠的棕色脂肪腫瘤細胞

睪丸特異激2抗體白齒菌卡波西肉瘤細胞
HDAC抑制劑(Dacinostat)pCDNA3.1(+） 2-基吡表皮生長因子

阿達青霉 4,6-二羥基-2-甲硫基嘧啶細小病

釀酒酵母 2-溴-6-色C氧化

干酪乳桿 2-氟-3-孕酮受體

香魏菇 2-巰基乙烷磺鈉雌二受體

褐帶栓 3,3'-亞甲基二睪酮

銅綠假單胞 L-烯基甘維生A

枯草芽孢桿 4-溴吡啶鹽鹽

Rhizobium miluonense 4-甲氧基苯肼鹽鹽疫巴氏桿抗體

金黃色葡萄球 2-脫氧-D-半乳糖鴨疫巴氏桿抗體

鼠傷門氏 TA2 4-氟-2-三氟甲甘油-3-磷脫氫

金龜子綠僵 2-異乙酯甘油-3-磷脫氫

寬褶菇 2(2-吡啶)酮疫里默氏桿1型

棲土藤黃色單胞 9-溴芴疫里默氏桿

橙灰鏈霉乙酰酮鈣（CAA）8羥基脫氧鳥
操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)