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貨號 | FS-X10611 |
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中文名稱:EGFR抑制劑(AZD3759)
英文名稱:AZD3759
產品規格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10611
產品介紹:
AZD3759是一種有效的可滲透中樞神經系統的EGFR抑制劑。作用于EGFRwt,EGFRL858R和EGFRexon19Del,IC50分別為0.3,0.2和0.2nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫療及其他用途! 號:1626387-80-1 純度:99.61% 分子量:459.9 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
大腸埃希氏菌*Alexa Fluor 488標記的羊抗兔IgGAnti-SCRIB Antibody環氧化合物水解3(EPHX3)
釀酒酵母Alexa Fluor 350標記的羊抗小鼠IgGAnti-SCRIB Antibody環腺二磷核糖水解(cADPRH)
馬克斯克魯維酵母Alexa Fluor 488標記的羊抗小鼠IgGAnti-SCRIB Antibody環前列腺受體(PTGIR)
熱吸水鏈霉菌Alexa Fluor 555標記的羊抗小鼠IgGAnti-SDC1 Antibody環加氧2(PTGS2)
節桿菌Alexa Fluor 647標記的羊抗小鼠IgGAnti-SCTR Antibody環加氧1(PTGS1)
嘴突凸臍蠕孢PE-CY5標記的羊抗小鼠IgGAnti-SDC1 Antibody環胍肽(CCP)
冷湖黃桿菌PE-Cy7標記的羊抗小鼠IgGAnti-SDC3 Antibody踝蛋白2(TLN2)
熱帶假絲酵母Cy3標記的羊抗小鼠IgGAnti-SDC4 Antibody(PB0464)踝蛋白(TLN)
產黃青霉PE標記的羊抗小鼠IgGAnti-SDCBP Antibody滑行蛋白γ(TXLNγ)
地衣芽孢桿菌PE-Cy7標記的小鼠抗豚鼠IgGAnti-SDHA Antibody滑行蛋白β(TXLNβ)
銅抗性鞘菌Cy3標記的羊抗豚鼠IgGAnti-SDHA Antibody滑行蛋白α(TXLNα)
籃狀菌屬辣根過氧化物標記的羊抗兔IgGAnti-SDHA Antibody花生四烯脂加氧3(ALOXE3)
大豆慢生根瘤菌PE標記的兔抗羊IgGAnti-SDHA Antibody花生四烯-5-脂加氧(ALOX5)
葡萄座腔菌Alexa Fluor 647標記的驢抗羊IgGAnti-SDHB Antibody花生四烯-15-脂加氧B(ALOX15B)
Brenneria nigrifluensPE-Cy5.5標記的驢抗羊IgGAnti-SDHB Antibody花生四烯-15-脂加氧(ALOX15)
黃曲霉Alexa Fluor 350標記的小鼠抗羊IgGAnti-SDHC Antibody花生四烯-12-脂加氧(ALOX12)
神經元X連鎖蛋白/兒童自閉癥相關蛋白抗體香菇(斜面)大鼠肺動脈成纖維細胞提取物
神經元Y連鎖蛋白抗體兒童自閉癥相關蛋白灰黃青霉大鼠肺大動脈內皮細胞提取物
神經連接蛋白2抗體嗜根考克氏菌(藤黃八疊球菌)大鼠肺大動脈平滑肌細胞提取物
NIPA樣蛋白3抗體普通變形桿菌大鼠肺大靜脈平滑肌細胞提取物
EGFR抑制劑(AZD3759)醋桿屬 己乙酯雌酮
病研所芽孢桿 己乙酯馬烯雌酮
Marisediminicola Fmoc-L-谷γ芐酯促腎上腺皮質
死亡谷芽孢桿 (1S,2R)-1-苯基-2-(1-吡咯烷基)-1-熱休克蛋白90
產朊假絲酵母 硫氧鈦-硫 水合物地塞松
釀酒酵母(有現成的) 三銅 水合物維生B1
總狀共頭霉 4-叔丁基苯天門冬氨基轉移
褐環乳牛肝 克羅拉濱天門冬氨基轉移
頂頭孢霉 6--7--7-脫氮血清淀粉樣蛋白A
大豆慢生根瘤 4-氨酰苯C-反應蛋白
油菜核病 雙(2-甲基烯基)(1,5-環辛二烯)釕(II)結合珠蛋白
哈茨木霉 雙環辛烯化銠二聚體維生D
Actinophytocola 3,4-二甲氧基苯α1性糖蛋白
乳乳球乳亞種 (1,5-環辛二烯)二甲基鉑(II)γ谷氨酰轉移
膠紅酵母 4,4-二氟環己甲谷脫氫
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