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貨號 | FS-X9600 |
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產品介紹:
細胞增殖檢測是評估細胞健康程度、遺傳毒性及抗腫瘤藥物效果的基礎實驗手段。精確的檢測細胞增殖方法是BrdU法。EdU法檢測試劑盒是brdu方法的革命性突破。EdU(5-溴-2-脫氧嘧啶)試劑盒是一種嘧啶類似物,可以在DNA合成期整合入DNA雙鏈。EdU法檢測是基于“點擊"反應,一種由銅催化的疊氮化合物和炔烴的原子共價反應。 本試劑盒中,EdU試劑含有炔烴,而kFlour647染料試劑含有疊氮化合物。點擊法的EdU標記增殖快速有效,易于使用。只需少量的疊氮化染料即可非常有效地標記出整合的EdU。標準化的固定和去污劑促滲可以使檢測試劑進入細胞,而brdu方法則需要DNA變性(如酸變性、熱變性或者用Dnase消化)去暴露BrdU,從而方便BrdU抗體結合。 |
中文名稱:kFluor647-EdU法細胞增殖檢測試劑盒(流式)
英文名稱:
產品規格:20T|10T|50T
貨號:FS-X9600
實驗報告:
一、分離與培養: 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養; 5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養; | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;
5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
原鈣黏suβ5(PCDHβ5)檢測試劑盒 forProtocadherinBeta5(PCDHb5)
鞘氨chun-1-磷suan磷suanmei1(SGPP1)檢測試劑盒 forSphingosine-1-PhosphatePhosphatase1(SGPP1)
調節激活正常T-細胞表達分泌因子(RANTES)檢測試劑盒 forRegulatedOnActivationInNormalT-CellExpressedAndSecreted(RANTES)
主要性蛋白(MBP)檢測試劑盒 forMajorBasicProtein(MBP)
V-Yes-1Yamaguchi肉瘤病毒相關癌基因同源物(LYN)檢測試劑盒 forV-Yes-1YamaguchiSarcomaViralRelatedOncogeneHomolog(LYN)
肉毒-O-jia基轉移mei(CORT)檢測試劑盒 forCarnitine-O-Octanoyltransferase(CORT)
煙型受體α3(CHRNα3)檢測試劑盒 forCholinergicReceptor,Nicotinic,Alpha3(CHRNa3)
巨噬細胞幼紅細胞黏附蛋白(MAEA)檢測試劑盒 forMacrophageErythroblastAttacher(MAEA)
shi神經縮蛋白3(OPA3)檢測試劑盒 forOpticAtrophy3(OPA3)
類胰蛋白mei(TPS)檢測試劑盒 forTryptase(TPS)
載脂蛋白E(APOE)檢測試劑盒 forApolipoproteinE(APOE)
凋亡相關因子配體(FASL)檢測試劑盒 forFactorRelatedApoptosisLigand(FASL)
脂肪meiM(LIPM)檢測試劑盒 forLipaseM(LIPM)
HtrA絲氨suan肽mei4(HTRA4)檢測試劑盒 forHtrASerinePeptidase4(HTRA4)
Kindlin3蛋白(KIND3)檢測試劑盒 forKindlin3(KIND3)
激肽釋放mei6(KLK6)檢測試劑盒 forKallikrein6(KLK6)
去jia(NE)檢測試劑盒 forNoradrenaline(NE)
kFluor647-EdU法細胞增殖檢測試劑盒(流式)甜菊雙糖甙A標準品 規格:300mg 英文名稱:Rebaudioside A
拉定標準品 規格:200mg 英文名稱:Cephradine
碳suan鉀標準品 規格:1g 英文名稱:Potassium Carbonate (AS)
標準品 規格:200mg 英文名稱:Perphenazine
鹽suan異丙嗪標準品 規格:500mg 英文名稱:Promethazine Hydrochloride
嘧達莫標準品 規格:200mg 英文名稱:Dipyridamole
鹽suan去jia咪嗪標準品 規格:125mg 英文名稱:Desipramine Hydrochloride
維生suK3標準品 規格:200mg 英文名稱:Menadione (Vitamin K3)
lv氮草標準品 規格:200mg 英文名稱:Chlordiazepoxide CIV
benjiasuan鉀標準品 規格:1g 英文名稱:Potassium Benzoate (AS)
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