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當前位置：上海撫生實業有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> TUNEL檢測陽性對照制備試劑盒
| 貨號 | FS-X9535 |
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產品介紹:
本試劑盒可以用于TUNEL檢測陽性對照的制備，制備后的陽性對照可以用于一步法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(YT135)的熒光，也可以用于顯色法TUNEL細胞凋亡檢測試劑盒(YT137)的顯色檢測。DNase I可以剪切基因組DNA，使基因組DNA產生片段化(fragmentation)。基因組被片段化的細胞在用TUNEL法檢查時會呈陽性染色。本試劑盒足夠制備10個陽性對照。 試劑盒組份： DNase I—————————10μl Reaction Buffer(10X)——200μl 注意事項：需自備用于TUNEL檢測的組織切片、或培養細胞的片子。需自備TUNEL檢測試劑盒。 |
中文名稱：TUNEL檢測陽性對照制備試劑盒
英文名稱：Positive control preparation kit for TUNEL detection
產品規格：10次
貨號：FS-X9535
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
RNA結合基元蛋白24(RBM24)檢測試劑盒 forRNABindingMotifProtein24(RBM24)
神經型一氧化氮合mei(NOS1)檢測試劑盒 forNitricOxideSynthase1,Neuronal(NOS1)
載脂蛋白C1(APOC1)檢測試劑盒 forApolipoproteinC1(APOC1)
粘蛋白1(MUC1)檢測試劑盒 forMucin1(MUC1)
細胞色suP450家族成員26A1(CYP26A1)檢測試劑盒 forCytochromeP45026A1(CYP26A1)
上皮性鈣黏附蛋白(CDHE)檢測試劑盒 forCadherin,Epithelial(CDHE)
胰高血糖su樣肽1(GLP1)檢測試劑盒 forGlucagonLikePeptide1(GLP1)
腭/肺/鼻上皮癌關聯蛋白(PLUNC)檢測試劑盒 forPalate/LungAndNasalEpitheliumAssociatedProtein(PLUNC)
腺高半胱氨suan水解mei(AHCY)檢測試劑盒 forAdenosylhomocysteinase(AHCY)
脫氧核糖核suanmeiⅠ樣2(DNASE1L2)檢測試劑盒 forDeoxyribonucleaseILikeProtein2(DNASE1L2)
白介su6(IL6)檢測試劑盒 forInterleukin6(IL6)
結締組織生長因子(CTGF)檢測試劑盒 forConnectiveTissueGrowthFactor(CTGF)
Pim-3原癌基因(PIM3)檢測試劑盒 forPim-3Oncogene(PIM3)
膜聯蛋白A7(ANXA7)檢測試劑盒 forAnnexinA7(ANXA7)
血管生成su2(ANGPT2)檢測試劑盒 forAngiopoietin2(ANGPT2)
肝配蛋白A3(EFNA3)檢測試劑盒 forEphrinA3(EFNA3)
羧suan酯mei3(CES3)檢測試劑盒 forCarboxylesterase3(CES3)
TUNEL檢測陽性對照制備試劑盒葡聚糖40系統適用性用標準品 規格:200mg 英文名稱：Dextran 40 System Suitability
葡聚糖70標準品 規格:50mg 英文名稱：Dextran 70
葡聚糖70系統適用性用標準品 規格:200mg 英文名稱：Dextran 70 System Suitability
右旋糖酐死體積標記物標準品 規格:100mg 英文名稱：Dextran Vo Marker
葡聚糖4校準用標準品 規格:100mg 英文名稱：Dextran 4 Calibration
葡聚糖10校準用標準品 規格:100mg 英文名稱：Dextran 10 Calibration
葡聚糖40校準用標準品 規格:100mg 英文名稱：Dextran 40 Calibration
葡聚糖70校準用標準品 規格:100mg 英文名稱：Dextran 70 Calibration
葡聚糖250校準用標準品 規格:100mg 英文名稱：Dextran 250 Calibration
花旗參精粉標準品 規格:1．5g 英文名稱：
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