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貨號(hào)	FS-X10876

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：polo-like kinase1(PLK1)抑制劑（TAK-960）

英文名稱：TAK-960

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10876

產(chǎn)品介紹:

TAK-960是一種有效的，選擇性的polo-like kinase1(PLK1)抑制劑，在3μM ATP的條件下，IC50值為1.5nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1137868-52-0

純度：99.22%

分子量：561.6

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

戊糖片球菌*大鼠堿性成纖維生長(zhǎng)因子Anti-S0A3 Antibody人凝血(TM)

羅伊氏乳桿菌小鼠補(bǔ)體片斷3aAnti-S0A7L2 Antibody人Ⅶ(FⅦ)

熱噬淀粉芽孢桿菌人抗浦肯野抗體/抗Yo抗體Anti-S1PR1 Antibody人Ⅶ(FⅦ)

枯草芽孢桿菌大鼠巨噬炎癥蛋白5Anti-S0Z Antibody人可溶性白抗原G(sHLA-G)

白黃小脆柄菇小鼠17羥孕Anti-SAA4 Antibody人可溶性白抗原G(sHLA-G)

假木豆根瘤菌人抗Sa抗體Anti-S1PR4 Antibody人凝血原(PT)

土星漢遜酵母人抗神經(jīng)元核抗體2型/抗Ri抗體Anti-SAE1 Antibody人凝血原(PT)

(蠟狀芽胞桿菌)小鼠間粘附分子1Anti-SAR1B Antibody人補(bǔ)體因子D(CFD)

天藍(lán)色鏈霉菌小鼠卵泡抑Anti-SCAF1 Antibody人補(bǔ)體因子D(CFD)

粘紅酵母大鼠可溶性血管粘附分子1Anti-Sam 68 Antibody人血漿纖維連接蛋白(pFN)

淺黃小孢絲鏈霉菌人異質(zhì)型核糖核蛋白復(fù)合物/抗RA33抗體Anti-SARNP Antibody人血漿纖維連接蛋白(pFN)

彎孢菌小鼠組織蛋白去乙酰化Anti-SAMHD1 Antibody人纖維連接蛋白(cFn)

釀酒酵母人抗Q熱抗體Anti-SCAF4 Antibody人纖維連接蛋白(cFn)

藤黃節(jié)桿菌小鼠雌三Anti-SCAF4 Antibody人總蛋白S(TPS)

巨大芽孢桿菌大鼠免疫球蛋白AAnti-SCAMP1 Antibody人總蛋白S(TPS)

肉褐鱗環(huán)柄菇小鼠雄烯二Anti-SCAF4 Antibody人血清剝奪反應(yīng)相關(guān)蛋白(SDPR)

硫氧還蛋白5抗體蟬花1-4（蟬擬青霉）（斜面）抗人微管a蛋白單抗7

轉(zhuǎn)錄因子Tbx18抗體裂殖酵母抗人TATA框結(jié)合蛋白交互作用蛋白單抗7

糖皮質(zhì)激誘導(dǎo)腫瘤壞死因子受體抗體茄腐鐮刀菌抗人轉(zhuǎn)鐵蛋白單抗7

胸腺基質(zhì)淋巴細(xì)胞生成-1抗體人厚垣普奇尼亞菌抗人肝癌單抗F117
polo-like kinase1(PLK1)抑制劑（TAK-960）枯草芽孢桿 N-叔丁氧羰基-O-芐基-L-蘇胰蛋白

聚多曲霉 6-溴-2-萘成纖維生長(zhǎng)因子

黑曲霉酞菁鉛戊型肝炎

香菇 (1R,2S,5R)-(-)-薄荷基 (S)-p-甲苯亞磺酯巴氏桿

大腸埃希 (S)-(+)-2-氨基-4-溴丁氫鹽瘟病抗原

橘青霉 2,6-二氟吡啶胰蛋白

波蘭青霉 3-氨基組織金屬蛋白抑制因子2

細(xì)孢毛霉 1,3-二甲氧基苯胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白7

枯草芽孢桿 1,1-二甲基-2-苯基乙乙酯肝型脂肪結(jié)合蛋白

綠色木霉 2,3-二溴酰中性粒明膠相關(guān)脂質(zhì)運(yùn)載蛋白2

無托品酰白介5

葡萄座腔 N,N'-二苯基乙二垂體中葉

枯草芽孢桿二芐基二硫卵泡抑

異常威克漢姆酵母 3-苯基-2-炔-1-傳染性胃腸炎病IgG抗體

葡萄汁酵母 (+)-5,6-O-異亞基-L-抗壞血糖聚糖
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)