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上海撫生實(shí)業(yè)有限公司
初級(jí)會(huì)員 | 第8年

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Calcein AM細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒

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品       牌其他品牌

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所  在  地上海市

更新時(shí)間:2022-05-09 14:16:56瀏覽次數(shù):157次

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貨號(hào) FS-X9713
Calcein AM細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒正在熱銷的產(chǎn)品:BrdU 溴脫氧尿苷單克隆抗體3,4-(亞二氧)苯 98%
BrdU 溴脫氧尿苷抗體麥芽糖
BRN3A 轉(zhuǎn)錄因子Brn3蛋白抗體DL-薄荷 99%
Brs3/Bombesin Receptor 3 蛙皮受體3抗體次綠 80%
SMARCA4/SNF2 beta 抑癌因SNF2β抗體二酯 for HPLC, ≥99%
Bruce

中文名稱:Calcein AM細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:500T|1000T

貨號(hào):FS-X9713

產(chǎn)品介紹:

綠色熒光細(xì)胞活性檢測(cè)試劑盒是采用一種可對(duì)活細(xì)胞進(jìn)行熒光標(biāo)記的細(xì)胞染色試劑,檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。當(dāng)熒光染色試劑其進(jìn)入到細(xì)胞質(zhì)后,酯酶會(huì)將其水解并留在細(xì)胞內(nèi),發(fā)出強(qiáng)綠色熒光,它的細(xì)胞毒性很低,不會(huì)抑制任何的細(xì)胞功能如增殖或淋巴球的趨化性。

儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存。

有效期:一年。

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);

4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min;

2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜;

5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

骨粘連蛋白(ON)英文名:ON β淀粉樣肽(1-28)抗體包裝5g

骨形成蛋白6(BMP-6)英文名:BMP-6 有絲分裂激B抗體包裝5g

骨形成蛋白(BMPs)英文名:BMPs 軟骨蛋白聚糖抗體包裝25g

骨涎蛋白(BSP)英文名:BSP 去整合樣金屬蛋白10抗體包裝5g

骨退化特異標(biāo)志物(CTX-2)英文名:CTX-2 含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族9抗體包裝100mg

骨特異性堿性磷B(ALP-B)英文名:ALP-B 含錨蛋白重復(fù)序列-因子信號(hào)抑制物盒蛋白家族8抗體包裝1ml

骨特性堿性磷(BALP)英文名:BALP 植物生長(zhǎng)激ABP1抗體包裝25ml

骨橋(OPN)英文名:OPN 肌動(dòng)蛋白相關(guān)蛋白1抗體包裝5ml

骨膠原交聯(lián)(Cr)英文名:Cr α紅分化相關(guān)因子抗體包裝1g

骨鈣/骨谷蛋白(OT/BGP)英文名:OT/BGP 血管緊張激活蛋白1抗體包裝5g

骨鈣(OT)英文名:OT Alpha清蛋白抗體包裝1g

骨鈣(BGP)英文名:BGP AFAP1L2抗體包裝1g

骨成型蛋白受體Ⅱ(BMPR-Ⅱ)英文名:BMPR-Ⅱ 神經(jīng)分化相關(guān)蛋白AHNAK抗體包裝5MG

骨成型蛋白受體1A(BMPR-1A)英文名:BMPR-1A 粘合連接相關(guān)蛋白1抗體包裝1g

骨成型蛋白9(BMP-9)英文名:BMP-9 去整合樣金屬蛋白13抗體包裝5g

脊髓小腦共濟(jì)失調(diào)2型蛋白抗體轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)Fluticasone Propionate is a synthetic glucocorticoid, used to treat non-allergic
Calcein AM細(xì)胞增殖與毒性檢測(cè)試劑盒新疆溶桿 2-氨基異丁酸乙酯鹽酸鹽谷氧還蛋白1

黑木耳 2-基苯基酸1,3-酯谷氧還蛋白2

擬青霉 福沙吡坦骨保護(hù)

堅(jiān)強(qiáng)芽孢桿 5-甲氧基-1H--3-甲酸甲酯骨成型蛋白2

皺環(huán)球蓋菇 1-N-Cbz-4-N-(Boc-氨甲基)骨成型蛋白4

米蘭鏈霉 3-氨基-2-基-6-溴吡骨成型蛋白6

規(guī)則東方喜鹽 芐基-2-乙骨成型蛋白7

枯草芽孢桿 3-溴-5-(三氟甲基)芐骨成型蛋白受體2

白酒    2-氨基-4,6-二-5-甲酰基嘧啶骨鈣

釀酒酵母 道古霉骨堿性磷酸

玫瑰淡紫鏈霉 對(duì)羥基乙酯骨堿性磷酸

黑色淺灰鏈霉 PD158780骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)

弗吉尼亞鏈霉 2,4-二甲基吡咯-3-羧酸骨橋蛋白抗體(分泌型磷蛋白1)

鐮刀 4-溴-3-甲氧基甲酯骨橋

根瘤 (4-溴-2-基)甲骨特異性堿性磷酸

 


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