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細胞凋亡檢測試劑盒I(POD)

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產(chǎn)品型號

品       牌其他品牌

廠商性質(zhì)經(jīng)銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-09 12:36:58瀏覽次數(shù):171次

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貨號 FS-X9643
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異阿魏suan含量試劑盒 規(guī)格:100T 測試方法:高效液相色譜法
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飛燕草su-O-葡萄糖含量測試盒 規(guī)格:100T 測試方法:高效液相

產(chǎn)品介紹:

工作原理:

在機體內(nèi)部隨時都在發(fā)生著細胞的死亡。傳統(tǒng)上用顯微鏡來觀察細胞的死亡,其特征為核染色質(zhì)的濃縮及碎片的形成。但是這種現(xiàn)象出現(xiàn)的很晚,時間也很短暫。凋亡的特征是內(nèi)源性核酸內(nèi)切酶被激活,細胞自身的染色質(zhì)或DNA被切割,出現(xiàn)單鏈或雙鏈缺口,并產(chǎn)生與 DNA 斷點數(shù)目相同的3’-OH末端。末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(Terminal deoxynucleotidyl Transferase)可以將標記的dUTP(DIG-dUTP)標記至 3’-OH末端,DIG-dUTP結(jié)合在DNA斷點部位,可以通過生物標記的抗抗體(Anti-DIG-Biotin)反應后,再結(jié)合鏈酶親和素-過氧化物酶(SABC),然后加入顯色底物DAB予以顯示。凋亡的細包核呈黃色,從而可以在顯微鏡下觀察到著色的凋亡細胞。

試劑盒內(nèi)容:

1.標記緩沖液(Labeling Buffer)1ml

2.末端脫氧核糖核酸轉(zhuǎn)移酶(TdT,×20)20μl

3.DIG-dUTP(×20)20μl

4.封閉液(Blocking Reagent)4ml

5.生物su化抗抗體(× 100)20μl

6.SABC(× 100)20μl

7.Proteinase K(×200)50μl

8.抗體稀釋液 4ml

保存條件:-20℃冰凍保存。

保存期:一年

中文名稱:細胞凋亡檢測試劑盒I(POD)

英文名稱:

產(chǎn)品規(guī)格:20T

貨號:FS-X9643

實驗報告:

一、分離與培養(yǎng):

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);

5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng);

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;

5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

血管內(nèi)皮細胞蛋白C受體(PROCR)檢測試劑盒  forProteinCReceptor,Endothelial(PROCR)    

異檸檬suan脫氫mei1(IDH1)檢測試劑盒  forIsocitrateDehydrogenase1,Soluble(IDH1)    

Arkadia蛋白(ARK)檢測試劑盒  forArkadia(ARK)    

白介su6受體(IL6R)檢測試劑盒  forInterleukin6Receptor(IL6R)    

凋亡相關(guān)因子(FAS)檢測試劑盒  forFactorRelatedApoptosis(FAS)    

jia胎蛋白(αFP)檢測試劑盒  forAlpha-Fetoprotein(aFP)    

旁血小板溶蛋白(PPL)檢測試劑盒  forPeriplakin(PPL)    

轉(zhuǎn)運蛋白2(TNPO2)檢測試劑盒  forTransportin2(TNPO2)    

20S-蛋白mei體(20S-PSM)檢測試劑盒  for20S-Proteasome(20S-PSM)    

白細胞免疫球蛋白樣受體亞家族A成員3(LILRA3)檢測試劑盒  forLeukocyteImmunoglobulinLikeReceptorSubfamilyA,Member3(LILRA3)    

5-羥色an受體6(HTR6)檢測試劑盒  for5-HydroxytryptamineReceptor6(HTR6)    

蛋白二硫化物異構(gòu)meiA4(PDIA4)檢測試劑盒  forProteinDisulfideIsomeraseA4(PDIA4)    

粘蛋白5AC(MUC5AC)檢測試劑盒  forMucin5SubtypeAC(MUC5AC)    

載脂蛋白A4(APOA4)檢測試劑盒  forApolipoproteinA4(APOA4)    

suan激mei(PK)檢測試劑盒  forPyruvateKinase,LiverAndRBC(PK)    

基質(zhì)金屬蛋白mei27(MMP27)檢測試劑盒  forMatrixMetalloproteinase27(MMP27)    

細胞因子信號轉(zhuǎn)導抑制因子3(SOCS3)檢測試劑盒  forSuppressorsOfCytokineSignaling3(SOCS3)    
細胞凋亡檢測試劑盒I(POD)jia環(huán)suan相關(guān)物質(zhì)C標準品  規(guī)格:15mg  英文名稱:

紫杉chun標準品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Paclitaxel

富馬suan噻吡二an標準品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Methapyrilene Fumarate

妥布霉su標準品  規(guī)格:350mg  英文名稱:Tobramycin

睡茄交酯 A標準品  規(guī)格:15mg  英文名稱:Withanolide A

相關(guān)物質(zhì)A標準品  規(guī)格:15mg  英文名稱:

綠原suan標準品  規(guī)格:50mg  英文名稱:Chlorogenic Acid

suan拉貝爾標準品  規(guī)格:200mg  英文名稱:Labetalol Hydrochloride

fu烷相關(guān)物質(zhì)A標準品  規(guī)格:0.1ml  英文名稱:

ben磺suan美索達嗪標準品  規(guī)格:250mg  英文名稱:Mesoridazine Besylate

 


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