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Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒

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所  在  地上海市

更新時間:2022-05-09 10:49:20瀏覽次數:168次

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貨號 FS-X9560
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產品介紹:

在正常細胞中,磷脂酰絲氨suan(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側,而在細胞凋亡早期,細胞膜中的磷脂酰絲氨suan(PS)由脂膜內側翻向外側。Annexin V 是一種分子量為35~36kD 的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白,與磷脂酰絲氨suan有高度親和力,故可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨suan與凋亡早期細胞的胞膜結合。因此Annexin V被作為檢測細胞早期凋亡的靈敏指標之一。將Annexin V 進行熒光素FITC 標記,以標記了的Annexin V 作為熒光探針,利用熒光顯微鏡或流式細胞儀可檢測細胞凋亡的發生。

碘化丙啶(Propidium Iodide, PI)是一種核酸染料,它不能透過完整的細胞膜,但對凋亡中晚期的細胞和死細胞,PI 能夠透過細胞膜而使細胞核染紅。因此將Annexin V 與PI 匹配使用,就可以將處于不同凋亡時期的細胞區分開來。

本試劑盒可應用于培養細胞凋亡檢測(不推薦用于檢測組織樣本)。

中文名稱:Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒

英文名稱:Annexin V-FITC Apoptosis Detection Kit

產品規格:10T|20T|50T|100T

貨號:FS-X9560

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

類粘蛋白(ORM)elisa檢測試劑盒  英文名稱:ORM ELISA Kit,ORM,

人抗著絲點抗體(ACA/CENP)elisa檢測試劑盒  英文名稱:ACA/CENP ELISA Kit,ACA/CENP,

人抗神經元核抗體1型/抗Hu抗體(ANNA-1/Hu)elisa檢測試劑盒  英文名稱:ANNA-1/Hu ELISA Kit,ANNA-1/Hu,

人抗jia狀腺球蛋白抗體(ATGA/TGAB)elisa檢測試劑盒  英文名稱:ATGA/TGAB ELISA Kit,ATGA/TGAB,

人抗sp100抗體(sp100)elisa檢測試劑盒  英文名稱:sp100 ELISA Kit,sp100,

緊密連接蛋白1(ZO1)elisa檢測試劑盒  英文名稱:ZO1 ELISA Kit,ZO1,

性成纖維細胞生長因子6(bFGF-6)elisa檢測試劑盒  英文名稱:bFGF-6 ELISA Kit,bFGF-6,

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髓過氧化物mei特異性抗中性粒細胞胞質抗體IgG(MPO-ANCA IgG)elisa檢測試劑盒  英文名稱:MPO-ANCA IgG ELISA Kit,MPO-ANCA IgG,

受體型酪氨suan蛋白磷suanmei樣N(PTPRN)elisa檢測試劑盒  英文名稱:PTPRN ELISA Kit,PTPRN,

腎上腺髓質su(ADM)elisa檢測試劑盒  英文名稱:ADM ELISA Kit,ADM,

沙眼衣原體抗體(CT)elisa檢測試劑盒  英文名稱:CT ELISA Kit,CT,

熱休克蛋白糖蛋白96(HSP gp96)elisa檢測試劑盒  英文名稱:HSP gp96 ELISA Kit,HSP gp96,
Annexin V-FITC/PI雙染細胞凋亡檢測試劑盒3-jia氧基酪氨suan標準品  規格:50mg  英文名稱:

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利塞膦suan相關物質C標準品  規格:20mg  英文名稱:

suanjia肟標準品  規格:350mg  英文名稱:Cefmenoxime Hydrochloride

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