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Caspase-3活性測定試劑盒

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產品型號

品       牌其他品牌

廠商性質經銷商

所  在  地上海市

更新時間:2022-05-11 14:13:51瀏覽次數:201次

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貨號 FS-X9738
Caspase-3活性測定試劑盒正在熱銷的產品:CR1/CD35 Ⅰ型補體受體抗體(C3b/C4b受體抗體)草鍶 5N,99.999%
CD36/PAS-4 CD36抗體四硫磺鈉,二水 98%
CD4 CD4抗體硫-5-羥色肌酐 98%
CD7 CD7抗體(-)-鹽東莨菪 ≥99.0%
CD8 CD8抗體(-)-鹽東莨菪 ,99.0%
CD9/MRP-1 CD9蛋白抗體糖精鈉
C

產品介紹:

本試劑盒適用于測定哺乳動物組織、細胞caspase-3活性。測定原理基于Caspase-3特異水解多肽底物acetyl-Asp-Glu-Val-Asp p-nitroanilide(Ac-DEVD-pNA),釋放硝基pNA。游離硝基pNA呈黃色在405nm具有大吸收峰,用普通可見光分光光度比色方法測定。根據pNA標準管吸光度OD值和標準曲線,計算來自底物肽釋放的pNA濃度,得到Caspase-3水解活性。

Caspase-3是凋亡過程中主要的終末剪切酶,因而也是研究多的caspase,它激活pro-caspase-2,6,7,9等,特異水解多種凋亡關鍵蛋白如PARP,介導細胞核染色質固縮、凋亡小體生成、核DNA斷裂。

運輸及保存:試劑常溫運輸。到達后按要求儲存,1年內穩定。

所需儀器:酶標儀與96孔酶標板;或可見光分光光度計配100μl容積的石英比色杯。

工作波長:大吸收波長405nm,如不具備也可在400~450nm范圍內測定,但靈敏度略降。

中文名稱:Caspase-3活性測定試劑盒

英文名稱:Caspase-3 Activity colorimetric assay Kit

產品規格:20T|50T|100T

貨號:FS-X9738

實驗報告:

一、分離與培養:

1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小;

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置;

3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化;

4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養基混懸,接種于25cm2培養瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養箱中培養;

5、差速貼壁1h后,吸出培養基,按實驗需要接種于6孔板中繼續培養;

二、免疫熒光鑒定:

1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;

2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;

3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;

5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h;

6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.

2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。

8、結果分析

a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養操作步驟:

1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;

2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養板(每孔一片)或培養皿中(每個平皿可放置2-3片);

3.在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時;

4.將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中,使蓋玻片*浸在培養液中;

5.將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時,將培養板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

Ⅲ型前膠原肽(PⅢNP)英文名:PⅢNP β分泌抗體包裝5g

Ⅲ型前膠原基端肽(PⅢNT)英文名:PⅢNT 相關死亡促進因子Bad抗體包裝100ml

Ⅲ型前膠原(HPCⅢ)英文名:HPCⅢ Bax包裝25ml

Ⅲ型膠原(Col Ⅲ)英文名:Col Ⅲ 程序性死亡配體2抗體包裝500ml

Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)英文名:HELIX-Ⅱ 膽汁鹽輸出泵/ATP結合盒轉運蛋白11抗體包裝1g

Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)英文名:CTX-Ⅱ β2微球蛋白抗體(單抗)包裝1g

Ⅱ型膠原(ColⅡ)英文名:ColⅡ 骨/軟骨蛋白多糖1抗體包裝5g

Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)英文名:Col Ⅱ 染色體相關蛋白CAP抗體包裝1g

Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)英文名:PⅠCP Bcl-2同源結構域樣蛋白1抗體包裝250mg

Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)英文名:PⅠNP Bcl2相關抗凋亡基因6抗體包裝10g

Ⅰ型前膠原C末端肽(CⅠCP)英文名:CⅠCP 半乳糖轉移7亞基β1,4抗體包裝50g

Ⅰ型膠原交聯羧基末端肽(ⅠCTP)英文名:ⅠCTP BEN結構域蛋白5抗體包裝100g

Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)英文名:NTX 巴德-畢德氏綜合征蛋白BBS5抗體包裝25g

Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)英文名:CTX-Ⅰ 癌相關蛋白1抗體包裝500g

Ⅰ型膠原(ColⅠ)英文名:ColⅠ 腦蛋白CG6抗體包裝1g

膽汁結合蛋白DDH2抗體促狀腺胚胎因子(TEF)PX-478 是有抗癌活性的缺氧誘導因子-1α (HIF-1α) 抑制劑,對一些癌系 IC50 為 20-30 μM。
Caspase-3活性測定試劑盒禾谷絲核 3--6-肼基噠磷脂A2

伊平屋橋大洋芽孢桿 2-甲基四氫噻吩磷脂A2受體

白僵 3,4-二乙酸磷脂A2受體1

交鏈孢霉 3-乙基噻吩磷脂酰

腦膜炎奈瑟 3-溴-2-羥基-5-磷脂酰甘油

金龜子綠僵 4-N-Boc-氨基環己酮磷脂酰肌蛋白聚糖1

棒桿 化鐠(III)六水合物磷脂酰肌蛋白聚糖3

釀酒酵母 2-氟-4-溴甲酯磷脂酰肌抗體IgG;IgM

腐生葡萄球腐生亞種 化鑭(III)六水合物磷脂酰

釀酒酵母 5-(甲氧羰基)-2-吡啶羧酸磷脂轉移蛋白

喜肌費爾酵母 甲基(-3-基)氨酸叔丁酯磷酯Cγ鏈

橄欖鏈霉 對肼基苯磺酰鹽酸鹽磷酯酰肌蛋白聚糖3

青紫黑鏈霉 2-乙氧基乙酸乙酯鱗狀癌相關抗原

豬鏈球分型血清參考品 血清型 SS34 甲基天冬氨酸流感病IgG抗體

乳微桿 4-羥丁基乙烯基流行性腮腺炎

 


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