當前位置:上海撫生實業有限公司>>細胞生物學試劑>>細胞凋亡與增殖>> 細胞毒性檢測試劑盒(乳酸脫氫酶法)
貨號 | FS-X9528 |
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操作步驟:
1、貼壁細胞的消化
①吸除培養液,用無菌 PBS、Hanks 液或無血清培養液洗滌細胞一次,以去除殘余的血清。
②加入少量Trypsin-EDTA solution,略蓋過細胞即可,室溫放置 0.5~2min, 不同的細胞消化時間有所不同。
③顯微鏡下觀察,細胞明顯收縮,并且肉眼觀察培養器皿底部發現細胞的形態發生明顯的變
化;或者用槍吹打細胞發現細胞剛好可以被吹打下來,吸除細胞消化液。加入含血清的 *細胞培養液,吹打下細胞,即可直接用于后續實驗。
④如果發現消化不足,則加入 Trypsin-EDTA solution 重新消化。
⑤如果發現細胞消化時間過長,未及吹打細胞,細胞已經有部分直接從培養器皿底部脫落, 直接用細胞培養液把細胞全部吹打下來。1000~2000g 離心 1min,沉淀細胞,盡量去除細胞消化液后,加入含血清的*培養液重新懸浮細胞,即可用于后續實驗。
2、組織的消化不同的組織需要消化的時間相差很大,通常以消化后可以充分打散組織為宜。
產品屬性:
產品名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 產品貨號 |
LDH Cytotoxicity Assay Kit | 100次|500次 | FS-X9528 |
產品介紹:
本試劑盒也稱乳酸脫氫酶檢測試劑盒(LDH Assay Kit)或乳酸脫氫酶釋放檢測試劑盒(LDH Release Assay Kit),是一種基于diaphorase催化的INT顯色反應,通過比色法檢測細胞毒性時釋放的乳酸脫氫酶活性或檢測其它樣品中的乳酸脫氫酶活性的試劑盒。 本試劑盒可以用于常規的乳酸脫氫酶活性的檢測,更常用于以LDH釋放為指標的細胞毒性檢測。同時,基于細胞總乳酸脫氫酶活性的檢測,本試劑盒也可以用于檢測細胞增殖和細胞毒性檢測。 細胞凋亡或壞死而造成的細胞膜結構的破壞會導致細胞漿內的酶釋放到培養液里,其中包括酶活性較為穩定的乳酸脫氫酶(lactate dehydrogenase,LDH)。通過檢測從質膜破裂的細胞中釋放到培養液中的LDH的活性,就可以實現對細胞毒性的定量分析。LDH釋放被看做細胞膜完整性的重要指標,并被廣泛用于細胞毒性檢測。LDH釋放被認為是以前使用放射性的51Cr標記細胞,隨后通過51Cr釋放進行細胞膜完整性檢測的安全有效的替代方法。 本試劑盒的基本原理是,在乳酸脫氫酶的作用下,NAD+被還原生成NADH,NADH和INT(2-p-iodophenyl-3-nitrophenyl tetrazolium chloride)被硫辛酰胺脫氫酶(diaphorase)催化反應生成NAD+和強生色物甲臜(formazan),在490nm波長下產生吸收峰,從而可以通過比色來定量乳酸脫氫酶的活性。吸光度與乳酸脫氫酶活性成線性正相關。該酶聯反應原理的示意圖如下: 試劑盒組份(100次為例): LDH釋放試劑——————1.5ml 乳酸溶液———————2ml 酶溶液————————1ml×2 INT溶液(10X)—————0.2ml INT稀釋液——————2ml 儲存條件:-20℃,有效期一年 |
注意事項:
1、本試劑盒僅供科學研究使用,不可用于診斷或治療。
2、螺旋蓋微量試劑管裝的試劑在開蓋前請短暫離心,將蓋和管內壁上的液體離心至管底,避免開蓋時試劑損失。
3、禁止與其他品牌的試劑混用,否則會影響使用效果。
4、樣品或試劑被細菌或真菌污染或試劑交叉污染可能會導致錯誤的結果。
5、最好使用一次性吸頭、管、瓶或玻璃器皿,可重復使用的玻璃器皿必須在使用前清洗并*清除殘留清潔劑。
6、避免皮膚或粘膜與試劑接觸。
7、需長時間保存可-20℃避光保存。避免反復凍融,否則將會增加空白吸收,從而影響檢測結果。最好小劑量分裝,用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光。
8、用培養基或 PBS 來配制待檢測藥物。如果待測藥物有還原性,則測定不含細胞,僅含有 MTS 的待測藥物溶液在 490 nm處的空白吸光度。如果該吸光度很小,則可以直接加入 MTS ,如果吸光度相對較大,則需要除去培養基,并用新鮮培養基洗滌細胞兩次,然后加入新的 100 μl 培養基和 10 μl MTS 進行檢測。
9、細胞處理需要小心操作,盡量避免人為的損傷細胞。
10、加 MTS 溶液后孵育時間的長短根據細胞的類型和細胞的密度等實驗情況而定,對于大多數情況孵育 1 小時即可,白細胞需要培養較長時間。
11、如果不是使用 96 孔板檢測,MTS 溶液的用量相應等比例增加即可。
胰島素樣蛋白3(INSL3)檢測試劑盒 forInsulinLikeProtein3(INSL3)
乙酰復合胺-O-甲基轉移酶(ASMT)檢測試劑盒 forAcetylserotonin-O-Methyltransferase(ASMT)
ⅡA組磷脂酶A2(PLA2G2A)檢測試劑盒 forPhospholipaseA2,GroupIIA(PLA2G2A)
8-羥基脫氧鳥苷(8-OHdG)檢測試劑盒 for8-Hydroxydeoxyguanosine(8-OHdG)
Cullin7蛋白(CUL7)檢測試劑盒 forCullin7(CUL7)
組織因子通道抑制因子(TFPI)檢測試劑盒 forTissueFactorPathwayInhibitor(TFPI)
環加氧酶2(PTGS2)檢測試劑盒 forProstaglandinEndoperoxideSynthase2(PTGS2)
半乳糖苷酶α(GLα)檢測試劑盒 forGalactosidaseAlpha(GLa)
肌球蛋白Ⅵ(MYO6)檢測試劑盒 forMyosinVI(MYO6)
C-型凝集素域家族11成員A(CLEC11A)檢測試劑盒 forC-TypeLectinDomainFamily11,MemberA(CLEC11A)
內質網核心信號1(ERN1)檢測試劑盒 forEndoplasmicReticulumToNucleusSignalling1(ERN1)
RasGTP酶激活蛋白1(RASA1)檢測試劑盒 forRasGTPaseActivatingProtein1(RASA1)
頭蛋白(NOG)檢測試劑盒 forNoggin(NOG)
免疫球蛋白A2(IgA2)檢測試劑盒 forImmunoglobulinA2(IgA2)
胱甘肽過氧化酶1(GPX1)檢測試劑盒 forGlutathionePeroxidase1(GPX1)
心鈉肽(ANP)檢測試劑盒 forAtrialNatriureticPeptide(ANP)
血因子Ⅶ(F7)檢測試劑盒 forCoagulationFactorVII(F7)
細胞毒性檢測試劑盒(乳酸脫氫酶法)唑沙宗相關物質A標準品 規格:50mg 英文名稱:
鹽酸標準品 規格:25mg 英文名稱:
鹽酸美普卡因標準品 規格:200mg 英文名稱:Meprylcaine Hydrochloride
福辛普利相關物質A標準品 規格:25mg 英文名稱:
美拉唑鎂標準品 規格:10mg 英文名稱:Omeprazole Magnesium
唑沙宗標準品 規格:350mg 英文名稱:Chlorzoxazone
阿托伐醌標準品 規格:200mg 英文名稱:Atovaquone
昔美酸沙美特羅標準品 規格:150mg 英文名稱:Salmeterol Xinafoate
水楊梅提取物標準品 規格:150mg 英文名稱:Pygeum Extract
羥苯丁酯標準品 規格:200mg 英文名稱:Butylparaben
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