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貨號(hào)	FS-X10869

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：HDAC6抑制劑(CAY10603)

英文名稱：CAY10603

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10869

產(chǎn)品介紹:

CAY10603是一種有效的，選擇性的HDAC6抑制劑，IC50值為2pM；同時(shí)可抑制HDAC1，HDAC2，HDAC3，HDAC8和HDAC10的活性，IC50值分別為271，252，0.42，6851，90.7nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1045792-66-2

純度：98.08%

分子量：446.5

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

厚環(huán)粘蓋牛肝菌大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅲ類Anti-RNF14 Antibody人活化蛋白C抵抗(APCR)

燕麥鐮孢大鼠主要組織相容性復(fù)合體Ⅱ類Anti-RNF144A Antibody人活化蛋白C抵抗(APCR)

裂孔平伏菌小鼠抗中性粒核周抗體Anti-RNF138 Antibody人N端外顯肽(Ext-N)

釀酒酵母人抗鈣蛋白抑抗體Anti-RNF144A Antibody人N端外顯肽(Ext-N)

大豆慢生根瘤菌兔骨成型蛋白7Anti-RNF149 Antibody人分泌成分(SC)

蠟狀芽孢桿菌小鼠磷脂酰肌抗體IgG/IgMAnti-RNF144B Antibody人分泌成分(SC)

小孢根霉寡孢變種人卵清蛋白特異性IgEAnti-RNF2 Antibody人二磷腺(ADP)

猴頭菇人抗核仁纖維蛋白抗體Anti-RNF34 Antibody人二磷腺(ADP)

薄層菌屬小鼠15脂加氧Anti-RNF2 Antibody人蛋白聚糖(PG)

郎伍德鏈霉菌大鼠透明質(zhì)Anti-RNF25 Antibody人蛋白聚糖(PG)

黃曲霉人系統(tǒng)性紅斑狼瘡Anti-ROBO1 Antibody人吡啶(PYD)

公州類諾卡氏菌大鼠胰高血糖樣肽1Anti-RNF7 Antibody人吡啶(PYD)

黑倚囊霉小鼠β干擾Anti-ROBO1 Antibody人5羥基乙(5-HIAA)

硫磺菌大鼠膽囊收縮/腸促胰肽Anti-RPA2 Antibody人5羥基乙(5-HIAA)

蠟樣芽孢桿菌人抗神經(jīng)節(jié)脂抗體Anti-RORC Antibody人12羥二十烷四烯(12-HETE)

林生毛霉小鼠肌鈣蛋白ⅠAnti-RPA3 Antibody人12羥二十烷四烯(12-HETE)

四分子交聯(lián)體抗體四旋蛋白藻瑚菌人卵巢癌多藥耐藥細(xì)胞

四分子交聯(lián)體9/四旋蛋白抗體綿皮臥孔菌（平板（赫塞汀）耐藥的人乳腺癌細(xì)胞

四分子交聯(lián)體12抗體四旋蛋白禾谷鐮刀菌人肺癌細(xì)胞/5Fu耐藥株

四分子交聯(lián)體13抗體四旋蛋白串珠鐮刀菌人卵巢癌細(xì)胞CoC1耐藥亞株
HDAC6抑制劑(CAY10603)查帕西斯瘤胃球青霉敏感紙片O型口蹄疫

嗜果刀孢炭疽桿診斷抗原胃抑

藍(lán)灰鏈霉炭疽桿噬體O型口蹄疫VPI抗體

多噬香鞘氨單胞炭疽桿疫苗甘脒基轉(zhuǎn)移

潮濕纖維單胞戊烷脒堿性成纖維生長因子2

豬鏈球分型血清參考品血清型 SS1/2 PLET瓊脂基礎(chǔ)支原體抗體

克里布所類諾卡氏指示選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)脂肪

黑曲霉碳?xì)溻c瓊脂基礎(chǔ)甲狀腺球蛋白

類干酪乳桿戊烷脒多粘B瓊脂基礎(chǔ)小反芻獸疫抗體

大腸桿溶血（0.1%）赫氏瓊脂硫代巴比土反應(yīng)物質(zhì)

凍土毛霉豆粉瓊脂藍(lán)舌病

費(fèi)氏中華根瘤堿性膽鹽瓊脂20羥二十烷四烯

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)