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| 貨號 | FS-X9698 |
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中文名稱：Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒
英文名稱：
產品規格：50T|100T
貨號：FS-X9698
產品介紹:
產品背景： 細胞凋亡是細胞的基本特征之一，它在機體的胚胎發育、組織修復、內環境的穩定和一些疾病發生過程等方面起著十分重要的作用。 在正常細胞中，磷脂酰絲氨suan(PS)只分布在細胞膜脂質雙層的內側，而在細胞凋亡早期，細胞膜中的磷脂酰絲氨suan(PS)由脂膜內側翻向外側。在體內，巨噬細胞可以識別翻轉到細胞膜表面的PS 從而將這些程序性死亡的細胞清除，因此凋亡過程中并不伴隨局部的炎癥反應，而在細胞壞死的過程中則常常伴隨著炎癥反應。 AnnexinⅤ是一種分子量為35-36kD的Ca2+依賴性磷脂結合蛋白，能與細胞凋亡過程中翻轉到膜外的PS 高親和力特異性結合。PS 外翻發生在細胞核破裂，DNA 片段化以及凋亡相關蛋白出現之前，這使得Annexin V 與PS的結合成為凋亡早期的一種重要檢測標志事件。 檢測原理： 在正常的活細胞中，磷脂酰絲氨suan(phosphotidylserine，PS)位于細胞膜的內側，但在早期凋亡的細胞中，PS 從細胞膜的內側翻轉到細胞膜的表面，暴露在細胞外環境中。 Annexin-Ⅴ能與PS 高親和力結合。可通過細胞外側暴露的磷脂酰絲氨suan與凋亡早期細胞的胞膜結合。用標記了PE的AnnexinⅤ作為熒光探針，利用流式細胞儀或熒光顯微鏡可檢測細胞凋亡的發生。細胞壞死的過程中也會發生細胞膜損傷，壞死的細胞會結合Annexin V-PE。 Annexin V-PE 通常與細胞膜非滲透性核酸熒光染料聯合使用以檢測凋亡細胞。常用的染料是7-AAD。正常細胞和早期凋亡細胞的細胞膜是完整的，核酸染料7-AAD 不能透過完整的細胞膜，但在凋亡中晚期的細胞和壞死細胞，7-AAD 能夠透過細胞膜與細胞核結合呈現紅色。 7-AAD/Annexin V-PE試劑盒將AnnexinⅤ與7-AAD匹配使用，可以將凋亡早期的細胞和晚期的細胞以及死細胞區分開來。壞死細胞可以同時與Annexin V-PE和7-AAD 結合顯色，而7-AAD 則被排除在活細胞(PE陰性)和早期凋亡細胞(PE陽性)之外。在沒有巨噬細胞的情況下，凋亡的后階段會像細胞壞死一樣發生整個細胞的解體，從而使凋亡晚期的細胞也同時被PE和7-AAD 結合染色呈現雙陽性。 儲存條件：染色液2-8℃避光保存；結合液2-8℃保存；長期不用-20℃保存。 Annexin V-PE染色液避免反復凍融，凍融2次以上可能會失效。長期保存分裝后-20℃保存。 有效期：一年。 |
培養操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養； 5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數目，需根據細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養箱培養24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
腦啡肽原B(PDYN)英文名：PDYN 乙脫氫2型抗體包裝5g
腦啡肽原A(PENK)英文名：PENK γ-基丁脫氫抗體包裝1g
腦腸肽(Gehrelin)英文名：Gehrelin 衰老相關蛋白5抗體包裝25g
腦腸肽(BGP/Gehrelin)英文名：BGP/Gehrelin 磷化熱休克蛋白β5/αb晶體蛋白質/α-晶體蛋白b鏈抗體包裝5g
末端補體復合物C5b-9(TCC C5b-9)英文名：TCC C5b-9 釉基質蛋白抗體包裝1g
膜聯蛋白Ⅴ(ANX-Ⅴ)英文名：ANX-Ⅴ 磷化腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝25g
繆勒管抑制物質/抗繆勒管激(AMH)英文名：AMH 磷化腺苷單磷活化蛋白激α2抗體包裝5g
苗條受體(LR/Ob-R)英文名：LR/Ob-R 磷化雄激受體抗體包裝1g
免疫球蛋白M(IgM)英文名：IgM 磷化雄激受體抗體包裝5g
免疫球蛋白G4(IgG4)英文名：IgG4 磷化雄激受體抗體包裝1g
免疫球蛋白G2(IgG2)英文名：IgG2 磷化雄激受體抗體包裝5g
免疫球蛋白G1(IgG1)英文名：IgG1 錨定蛋白重復結構域蛋白激ANKK1抗體包裝1g
免疫球蛋白G(IgG)英文名：IgG 磷化內收蛋白抗體包裝25g
免疫球蛋白E(IgE)英文名：IgE 膜粘連蛋白11抗體包裝5g
免疫球蛋白D(IgD)英文名：IgD 膜粘連蛋白13抗體包裝100mg
肌動蛋白α/α-SMA/α Actin抗體免疫球蛋白G(IgG)Torezolid (TR-701; tedizolid) is a novel oxazolidinone for gram-positive infecti
Annexin V-PE/7-AAD細胞凋亡檢測試劑盒黑木耳 N-甲基-D-脯氨補體因子Bb
黃桿 4-乙氧羰基-3-乙氧基補體因子D
枯草芽孢桿 1-乙基環己基碳酸酯補體因子H
檸檬形克勒克酵母 6-喹啉-2-酮不對稱二甲基
球孢白僵 2--3-三氟甲基-5-硝基吡啶層粘連蛋白
Rhizobium alkalisoli 2-羥基-5-硝基-3-三氟叉頭框C2
產腸大腸埃希氏 7-硝基-1,2,3,4-四氫異喹啉鹽酸鹽叉頭型基因P3
產朊假絲酵母 4-溴酮腸三葉因子
蘇云金芽孢桿 3-甲酸甲腸脂肪酸結合蛋白
假單胞 四丁基氟氫銨超敏C反應蛋白
粉狀畢赤酵母 白屈菜酸超敏游離雌三
灰樹花G25 D-3-溴苯氨酸超氧化物歧化
葡萄牙鏈霉 N-Boc-5-甲氧基沉默調節蛋白1
谷糠乳桿 5-氨基間苯二甲酸二甲酯成骨生長肽
秀珍菇 10-(2,5-二羥基苯基)-10H-9-氧雜-10-磷雜菲-10-氧化物成熟BNP
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