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單克隆抗體( mAbs )已經(jīng)成為生物制藥工業(yè)中生長(zhǎng)速度快的部分,具有先進(jìn)的分子工程和抗體人源化技術(shù),使得為多種醫(yī)學(xué)疾病如癌癥、自身免疫性疾病、心血管疾病和傳染病產(chǎn)生治療性抗體成為可能。
這些候選物初使用雜交瘤技術(shù)或抗原免疫后的初級(jí)B細(xì)胞篩選產(chǎn)生。在抗體發(fā)現(xiàn)過程中,初級(jí)篩選對(duì)于鑒定具有結(jié)合特異性、種間交叉反應(yīng)性、選擇性和親和性等基本特性的細(xì)胞系具有重要意義。
接下來評(píng)估滿足這些特性的克隆的其它重要特性,這些特性可以包括IgG同種分型、抗體定量和細(xì)胞計(jì)數(shù)/健康,它們對(duì)于選擇鉛分子是必需的,如圖1所示。
小鼠抗體是使用酶聯(lián)免疫吸附測(cè)定( ELISA )從細(xì)胞上清液中定量的,這是一種常規(guī)技術(shù),盡管如此,它是持久的并且僅測(cè)量一個(gè)終點(diǎn),并且經(jīng)常需要樣品稀釋和多次洗滌步驟。
除此之外,在獲得足夠的洞察用于抗體的下游克隆之前,必須進(jìn)行其它測(cè)試,例如分離的IgG同種分型和細(xì)胞數(shù)量/健康。可以使用Intellicyt鼠標(biāo)IgG類型和滴度試劑盒簡(jiǎn)化這一傳統(tǒng)工作流程。
這是一種高通量多路分析,具有寬的動(dòng)態(tài)范圍,避免了樣品稀釋和洗滌步驟。它提供了一個(gè)簡(jiǎn)單的工作流程,能夠同時(shí)測(cè)量五個(gè)不同的端點(diǎn):
高含量的數(shù)據(jù)使得單克隆和多克隆孔之間能夠快速區(qū)分。它告訴研究者產(chǎn)生了多少IgG,用于定量穩(wěn)定克隆和下游功能測(cè)定。
它鑒定了同種型,有助于為PCR介導(dǎo)的基因克隆設(shè)計(jì)正確的引物。后,在進(jìn)行RNA分離之前,它監(jiān)測(cè)細(xì)胞的增殖和健康。
小鼠IgG類型和效價(jià)測(cè)定是Intellicyt綜合抗體發(fā)現(xiàn)平臺(tái)的一個(gè)組成部分。另一種解決方案是iQue Screener PLUS平臺(tái),它可以加快數(shù)據(jù)采集速度,并使384孔板的分析微型化。經(jīng)過20分鐘的數(shù)據(jù)采集,F(xiàn)oreCyt軟件提供了強(qiáng)大的數(shù)據(jù)挖掘工具,可以進(jìn)行大規(guī)模雜交瘤/ B細(xì)胞篩選研究。
ForeCyt軟件上的Panorama功能提供了動(dòng)態(tài)多板數(shù)據(jù)分析,包括具有用戶定義標(biāo)準(zhǔn)的圖譜,用于檢測(cè)和識(shí)別包含所需IgG同種型抗體濃度和細(xì)胞健康的樣品,這在分析大型多板篩選活動(dòng)時(shí)非常重要。總之,小鼠IgG類型和滴度測(cè)定能夠簡(jiǎn)化和加速抗體發(fā)現(xiàn)的工作流程,這意味著獲得可操作結(jié)果的時(shí)間更短。
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