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如何選擇細胞培養板？2017/07/06

ATCC細胞培養板的規模可大可小，你既可以使用生物反應器，也可以使用培養瓶或多孔板。如今，利用多孔板的細胞培養模式正倍受青睞，因為這有助于研究多個動態變量，減少實驗時間，并節約昂貴的試劑。除了標準的高通量微孔板，還有一些特殊的微孔板被開發出來，助力3D和器官型細胞培養。市場上的細胞培養板可不少，如何選擇合適的呢？在這篇文章中，BrandTechScientific的產品專家介紹了細胞培養中塑料制品的選購要點。在他們看來，我們需要重點考慮孔的數量、孔的形狀、微孔板顏色以及表面處理。1.孔的數量大多

人源細胞培養過程中可能出現的問題及解決方式2017/07/04

在人源細胞培養過程中會出現這樣或那樣的問題，客戶遇到的問題從細胞生長角度來說，針對細胞不貼壁、生長緩慢、生長不好，甚至死亡的原因，我們做以下分析并提出相對應的解決方法。一、培養細胞不貼壁可能原因：●*消化過度●支原體污染●培養基pH值過堿（NaHCO3分解）●細胞老化●接種細胞起始濃度太低或太高解決方法：●縮短*消化時間或降低*濃度●分離培養物，檢測支原體。清潔支架或培養箱。如發現支原體污染，丟棄培養物。●使用無菌醋酸溶液調整pH值或充入無菌CO2●啟用新的保種細胞二、懸浮細胞成簇可能原因：●培

單個細胞的生長過程2017/06/29

單個ATCC細胞的生長過程即為細胞周期，所謂細胞周期是為研究細胞的生長行為而提出的。在動物體內或體外培養中，細胞處于生長或靜止狀態。細胞生長包括DNA合成及細胞分裂兩個關鍵過程。細胞周期即一個母細胞分裂結束后形成的細胞至其下一次再分裂結束形成兩個子細胞的這段時期，可分為間期和M期(分裂期)兩個階段。細胞群中多數細胞處于間期，少數細胞處于M期。一般間期的時間較長，而M期的時間較短。在間期，細胞完成生長過程，主要為DNA的合成，即遺傳物質DNA的復制。在M期，細胞所完成的主要是分裂，即遺傳物質的分配

分析人源細胞的結構2017/06/27

人源細胞通常很小，需用顯微鏡才能見到，但也有肉眼可見的大型卵細胞。細胞的形狀因其生長、分化和功能的不同而有很大變化，有卵圓形、柱形、鱗形、梭形、樹枝形等。真核細胞的構造主要可分為細胞核、細胞質和細胞膜三部分。細胞膜之內的生活物質包括細胞核和細胞質統稱為原生質。活細胞的化學組成主要是水，約占90%，其余為蛋白質、核酸、脂類、糖類以及少量無機物質。在細胞質中有一些稱為細胞器的結構，如線粒體、溶酶體、高爾基體、內質網等。細胞膜內有兩種主要成分：細胞漿和細胞核。細胞漿中含有一些消耗和轉換能量的結構，以及

人源細胞的培養液2017/06/22

現代生物技術均通過人源細胞作為載體來進行，無論是基因治療、干細胞、克隆技術都在細胞內進行的。細胞的生長需要一定的營養環境，用于維持細胞生長的營養基質稱為培養基，即指所有用于各種目的的體外培養、保存細胞用的物質，就其本意上講為人工模擬體內生長的營養環境，使細胞在此環境中有生長和繁殖的能力。它是提供細胞營養和促進細胞生長增殖的物質基礎。細胞培養基其組成成分主要有：水、氨基酸、維生素、碳水化合物、無機離子及其他一些入核酸降解物、激素等。隨著動物細胞大規模培養技術的迅速發展，作為細胞培養領域中zui基本

如何消除組織培養的污染2017/06/20

人源細胞當重要的培養污染時，研究者可能試圖消除或控制污染。首先，確定污染物是細菌、真菌、支原體或酵母，把污染細胞與其它細胞系隔離開，用實驗室消毒劑消毒培養器皿和超凈臺，檢查HEPA過濾器。高濃度的抗生素和抗霉菌素可能對一些細胞系有毒性，因而，做劑量反應實驗確定抗生素和抗霉菌素產生毒性的劑量水平。這點在使用抗生素如*和抗霉菌素如泰樂菌素時尤其重要。下面是推薦的確定毒性水平和消除培養污染的實驗步驟。1)在無抗生素的培養基中消化、計數和稀釋細胞，稀釋到常規細胞傳代的濃度。2)分散人源細胞懸液到多孔培養

保存ATCC細胞的復蘇方法2017/06/15

1.ATCC細胞快速解凍凍存細胞從液氮中取出后，立即放入37℃水浴中，輕輕搖動冷凍管，使其在1分鐘內全部融化（不要超過3分鐘）。2.解凍后的細胞可直接接種到含*生長培養液的細胞培養瓶中直接進行培養，24小時后再用新鮮*培養液替換舊培養液，以去除DMSO。3.如果細胞對冷凍保護劑特別敏感解凍后的細胞應先通過離心去除冷凍保護劑，然后再接種到含*生長培養液的培養瓶中ATCC細胞。AJ6987[CBS669.85,FERM-P3696]Myceliophthorathermophila(Apinis)v

人源細胞的保存方法2017/06/13

1．人源細胞材料（1）細胞：取對數生長期的細胞。（2）10％二甲基亞砜保護液（二甲基亞砜能損壞濾器，而又被高壓所破壞，所以不能過濾或高壓消毒。其本身就是，無菌）：含10％二甲基亞砜、20％滅活胎牛血清，70％RPMI—1640液。（3）20％FCS—1640培養液：含*100U/ml，*100μg/ml。（4）滅菌的2ml安瓶等2．操作方法（1）去掉細胞培養瓶中的舊的培養液，加入10％FCS—1640液，使細胞懸浮。（3）1000r/min離心10min，去上清。細胞沉淀用10％二甲基亞砜保護液

干細胞解凍培養技巧分析2017/06/08

說明1.經過冷凍保存后的干細胞，其生存率會下降，冷凍時之冷卻速度，保存溫度，解凍時升高溫度的速度以及添加之冷凍保存液之種類、濃度等都可影響細胞存活率。2.一般而言，４℃以下慢慢地冷凍，保存于液態氮中（-196℃）。3.37℃快速解凍。4.保護劑（抗凍劑）：添加甘油（glycerol）（I0%左右）或dimethy1sulfoxide（DMSO）（5-10%）。5.有些細胞如果采用上述的方法時，無法得到高的存活率。此時，則必需考慮可能傷害細胞的機制，添加劑之作用等而來找出適當的條件來修正。材料:1

人源細胞培養實驗室的一些特殊設備2017/06/06

人源細胞培養實驗室除了應配備上述的常用基本設備以外，如有條件，可添置一些特殊或*的設備儀器，以便更有效、更、更深入地進行實驗室工作。例如：(1)酶聯免疫檢測儀——可用于進行免疫學測定及細胞毒性、藥物敏感性檢測等。(2)超低溫冰箱(-85℃)——便于儲存某些試劑及標本。(3)旋轉培養器——用于某些特殊細胞或需要收獲大量細胞的培養。(4)熒光顯微鏡——進行熒光染色樣本的觀察。(5)流式細胞儀——可更及快速檢測細胞。(6)用于檢測人源細胞培養條件的各種儀器，例如專門為快速分析細胞培養基中主要或關鍵營養

人源細胞出現問題不予以重發的情況有哪些？2017/06/01

人源細胞出現問題不予以重發的情況有哪些？（1）客戶造成細胞污染，不重發；（2）客戶不正確操作致細胞狀態不好，不重發；（3）非推薦細胞培養體系致的細胞狀態不好，不重發；（4）細胞狀態不好，未提供細胞培養前3天照片的，不重發；（5）細胞培養時經其它處理的，不重發；（6）細胞收到2天內，未告知，不重發；（7）視具體情況而定。F9(小鼠畸胎瘤細胞)人源細胞5×106cells/瓶×2FaDu(人咽鱗癌細胞)5×106cells/瓶×2FRhK-4(恒河猴胚腎細胞)5×106cells/瓶×2GBC-SD

腫瘤細胞的培養方法2017/05/25

腫瘤細胞是血液、淋巴和所有哺乳動物組織類型中所見的吞噬細胞。腫瘤細胞是造血系統中可塑性zui強的一種細胞，所有組織中都有這種細胞，并且其也具有*的功能多樣性。它們在正常發育、體內平衡、組織修復和對病原體的免疫反應中起很多不同作用。它們的多樣性意味著，幾乎每一種人類疾病都涉及它們，它們也是主要治療目標，因為它們的功能可以被加強或抑制，以改變疾病的結果。這個細胞生長快，條件好時24h內能分裂兩次至少。而且喜歡扎堆，所以2天就要傳代，不是真的空間不夠，而是細胞都擠在一起。所以，如果瓶子里細胞密度小，培

Caspase-3活性的檢測技術分析2017/05/23

Caspase家族在介導人源細胞凋亡的過程中起著非常重要的作用，其中caspase-3為關鍵的執行分子，它在凋亡信號傳導的許多途徑中發揮功能。Caspase-3正常以酶原(32KD)的形式存在于胞漿中，在凋亡的早期階段，它被激活，活化的Caspase-3由兩個大亞基(17KD)和兩個小亞基(12KD)組成，裂解相應的胞漿胞核底物，zui終導致細胞凋亡。但在細胞凋亡的晚期和死亡細胞，caspase-3的活性明顯下降。1Westernblot分析Procaspase-3的活化，以及活化的Caspas

培養細胞生長減慢原因分析2017/05/18

培養人源細胞生長減慢可能原因（1）由于更換不同培養液或血清（2）培養液中一些細胞生長必需成分如*或生長因子耗盡或缺乏或已被破壞。（3）培養物中有少量細菌或真菌污染（4）試劑保存不當（5）接種細胞起始濃度太低（6）細胞已老化（7）支原體污染建議解決方法（1）比較新培養液與原培養液成分，比較新血清與舊血清支持細胞生長實驗。讓人源細胞逐漸適應新培養液。（2）換入新鮮配制培養液，或補加*及生長因子。（3）用無抗生素培養液培養，如發現污染，丟棄培養物。或用抗生素除菌。（4）血清需保存在-5℃到-20℃。培

分析干細胞周期的操作步驟2017/05/16

Ⅰ、干細胞樣品準備準備以下一種或幾種樣品A、組織單細胞懸浮液(如淋巴腺、脾、骨髓、胎盤細胞)B、組織培養細胞C、Ficoll-hypaque分離的單核細胞Ⅱ、干細胞反應體系-DNA低滲緩沖液檸檬酸三鈉0.25gTriton-X1000.75mlPropidiumiodide0.025g核糖核酸酶0.005g蒸餾水250ml我們將該DNA低滲溶液于密閉瓶子中存放數月后并無發現有任何染色活性的丟失Ⅲ、染色1、每一個管子中放入1×106個細胞;2、樣品離心后盡可能*地移去上清液，并且不要打碎沉淀塊;3

ATCC細胞計數的原理和方法2017/05/09

一、原理培養的ATCC細胞在一般條件下要求有一定的密度才能生長良好，所以要進行細胞計數。計數結果以每毫升細胞數表示。細胞計數的原理和方法與血細胞計數相同。在細胞群體中總有一些因各種原因而死亡的細胞，總細胞中活細胞所占的百分比叫做細胞活力，由組織中分離細胞一般也要檢查活力，以了解分離的過程對細胞是否有損傷作用。復蘇后的細胞也要檢查活力，了解凍存和復蘇的效果。?（一）細胞計數1、將血球計數板及蓋片用擦試干凈，并將蓋片蓋在計數板上。2、將細胞懸液吸出少許，滴加在蓋片邊緣，使懸液充滿蓋片和計數板之間。3

配制可高壓滅菌粉末細胞培養基操作方法2017/05/04

1)ATCC細胞其配制用水及配制粉劑的稱取、及配制程序基本同過濾型培養基配制方法。溶解后高壓，通常在121℃、15psi下滅菌15分鐘。2)待細胞培養液冷卻至室溫，按一定比例加入無菌的*溶液、無菌7.5％（w/v）*溶液，加注射用水（水溫20℃～30℃）至規定體積，混勻。3)如果必要，用1mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調pH至所需值。4)溶液應在2℃－8℃下避光保存。原代骨細胞特制基礎培養基*ATCC細胞規格:500/250/100原代滑膜皮細胞特制基礎培養基*規格:500/250

人源細胞爬片的免疫熒光步驟2017/04/27

1.取出人源細胞爬片放到35mm或60mm用過的細胞培養皿里，PBS洗三遍。注意：有的時候作的細胞爬片可能比較小，因此夾取的時候要小心，注意反正面，放在皿里洗比較方便，避免了來回夾取，另外洗的時候加PBS不要太沖，不要細胞沖下來。洗的時候我都是多加PBS，稍晃一下就倒掉，沒有等5分鐘或10分鐘。2.4%冷的多聚甲醛固定20分鐘，PBS洗三遍。3.0.2%TritonX-100通透10分鐘，PBS洗三遍。4.人源細胞與二抗相同宿主的血清封閉30分鐘，PBS洗三遍。5.一抗4度濕盒內過夜，也可37度