GB/T 21916-2008水果罐頭中合成著色劑高效液相色譜法
1 范圍
本標準規定了水果罐頭中檸檬黃、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、紅、亮藍、赤蘚紅人工合成著色劑的高效液相色譜測定方法
本標準適用于水果罐頭中檸檬黃、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、紅、亮藍、赤蘚紅人工合成著色劑的測定
本標準檢出限為檸檬黃0.300mg/kg、莧菜紅0.300mg/kg、靛藍0.300mg/kg、胭脂紅0.300mg/kg、日落黃0.150mg/kg、紅0.150mg/kg、亮藍0.100mg/kg、赤蘚紅0.150mg/kg
2 原理
水果罐頭中的人工合成著色劑用乙醇-氨水提取，利用固相萃取柱凈化，采用高效液相色譜-紫外檢測器，外標法定量
3 試劑和材料
3.1 水：去離子水貨相當純度的水
3.2 甲醇：色譜純
3.3 無水乙醇：分析純
3.4 氨水：分析純
3.5 鹽酸：分析純
3.6 乙酸銨溶液（0.02mol/l）：稱取1.54g乙酸銨，加水溶解，定容至1000ml，經0.45um過濾器過濾
3.7 無水乙醇-氨水溶液：量取無水乙醇80ml，氨水1ml，加水定容至100ml，混勻
3.8 PH8D 50%甲醇溶液：量取甲醇50ml，加水定容至100ml，混勻，加氨水調PH值8
3.9 PH8的水：水加氨水調PH值到8
3.10 2%氨水：量取氨水2ml，加水定容至100ml，混勻
3.11 鹽酸-乙醇溶液（1+9）：量取10ml鹽酸、90ml乙醇，混勻
3.12 50%甲醇溶液：量取甲醇50ml，加水定容至100Ml，混勻
3.13 固相萃取柱或相當者：Sep-Pak Plus QMA360mg，顆粒度37um-55um，臨用前依次加5ml甲醇（3.2）和5ml水預處理，保持柱體濕潤
3.14 合成著色劑標準貯備液：準確稱取按其純度折算為99%質量的檸檬黃、莧菜紅、靛藍、胭脂紅、日落黃、紅、亮藍、赤蘚紅各0.0500g，置100ml容量瓶中，加水至刻度，配置成500ug/ml標準儲備液
3.15 合成著色劑標準使用液：臨用時將標準儲備液加水稀釋成20ug/ml的標準中間液，再將該中間液稀釋成0.100,0.200,0.400,1.00,3.00,5.00ug/ml的標準系列溶液，經0.45um過濾器過濾
4 儀器
4.1 501高效液相色譜儀，配有紫外檢測器，色譜工作站
4.2 分析天平：感量0.1mg
4.3 勻漿機
4.4 快速混勻器
4.5 離心機：3000r/min
4.6 恒溫水浴
4.7 0.45um水性樣品過濾器
4.8 固相萃取裝置
5 樣品制備
5.1 提取
將整份試樣用勻漿機打碎，再攪拌均勻，準確稱取2.00g左右樣品（精確至0.01g），裝入離心管中，加10Ml無水乙醇-氨水溶液，渦旋0.5min，再3000r/min離心10Min將上清液倒入塞有脫脂棉的玻璃漏斗中過濾，將剩余殘渣再重復操作三次，將收集的濾液（約40ml）置于80℃水浴中濃縮至約2ml，為試樣溶液
5.2 凈化
將濃縮后的試樣溶液用2%的氨水調成PH8后，轉移到預處理過的固相萃取中，依次用3MlPH8的水喝3MlPH8的50%甲醇以小于2ml/min的流速清洗，棄去全部流出液，再用10ml鹽酸-乙醇溶液（1+9）將著色劑洗脫出固相萃取柱，手機洗脫液，用氨水中和80℃水浴濃縮至盡干，冷卻后用50%的甲醇溶液溶解并定容至10Ml，經0.45um濾膜過濾后，進行高效液相色譜測定
6 測定
6.1 液相色譜條件
6.1.1 色譜柱：美國VertexC18色譜柱，4.6mm×250mm,5um
6.1.2 流動相：甲醇-乙酸銨溶液（0.02ml/l）
6.1.3 梯度洗脫：梯度洗脫條件見下表
時間/min 流速（ml/min） 甲醇% 乙酸銨溶液%
0 1.0 20 80
5 1.0 35 65
10 1.0 80 20
16 1.0 80 20
17 1.0 20 80
25 1.0 20 80
6.1.4 進樣量：10ul
6.1.5 檢測器：UV501紫外可見光檢測器選擇檸檬黃428nm、莧菜紅521nm、靛藍608nm、胭脂紅509nm、日落黃483nm、紅507nm、亮藍625nm、赤蘚紅529nm波長測定
6.2 測定
根據保留時間定性，外表峰面積法定量
八種合成著色劑標準品
7 結果計算
X=c×V×1000/m×1000
X-試樣中被測組分的含量，單位為毫克每千克（mg/kg）
c-由標準曲線得到的試樣溶液中被測組分的含量，單位為微克每毫升（ug/ml）
V-試樣溶液定容體積，單位為毫升（ml）
m-試樣質量，單位為克（g）
計算結果保留三位有效數字
8 精密度
在重復性條件下獲得的兩次獨立測定的結果的差值不得超過算術平均值的10%
