為了避免戴安高效液相色譜儀的常見操作失誤,操作人員需要遵循一系列規(guī)范的操作步驟和維護(hù)措施。以下是一些具體的建議:
一、流動(dòng)相的處理
1.過濾:應(yīng)預(yù)先除去流動(dòng)相中的任何固體微粒,可采用Millipore濾膜(0.2μm或0.45μm)等濾器進(jìn)行過濾。泵的入口都應(yīng)連接砂濾棒(或片),輸液泵的濾器應(yīng)經(jīng)常清洗或更換。
2.脫氣:防止流動(dòng)相中的氣泡對(duì)系統(tǒng)造成不良影響,確保流動(dòng)相的穩(wěn)定性。
二、泵的維護(hù)
1.及時(shí)清洗:在停泵過夜或更長(zhǎng)時(shí)間的情況下,必須泵入純水將泵充分清洗后,再換成適合于色譜柱保存和有利于泵維護(hù)的溶劑(對(duì)于反相鍵合硅膠固定相,可以是甲醇或甲醇-水)。流動(dòng)相不應(yīng)含有任何腐蝕性物質(zhì),含有緩沖液的流動(dòng)相不應(yīng)保留在泵內(nèi)。
2.防止空轉(zhuǎn):泵工作時(shí)要留心防止溶劑瓶?jī)?nèi)的流動(dòng)相被用完,避免空泵運(yùn)轉(zhuǎn)磨損柱塞、缸體或密封環(huán)。
三、梯度洗脫的注意事項(xiàng)
1.溶劑互溶性:注意溶劑的互溶性,不相混溶的溶劑不能用作梯度洗脫的流動(dòng)相。有些溶劑在一定比例內(nèi)混溶,超出范圍后就不互溶,使用時(shí)更要引起注意。當(dāng)有機(jī)溶劑和緩沖液混合時(shí),還可能析出鹽的晶體,尤其使用磷酸鹽時(shí)需特別小心。
2.空白梯度洗脫:進(jìn)行樣品分析前必須進(jìn)行空白梯度洗脫,以辨認(rèn)溶劑雜質(zhì)峰。
3.粘度變化:混合溶劑的粘度常隨組成而變化,在梯度洗脫時(shí)需注意壓力的變化,防止超過輸液泵或色譜柱能承受的最大壓力。
四、六通閥的使用和維護(hù)
1.樣品過濾:樣品溶液進(jìn)樣前必須用0.45μm濾膜過濾,以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。
2.閥芯轉(zhuǎn)動(dòng):轉(zhuǎn)動(dòng)閥芯時(shí)不能太慢,更不能停留在中間位置,防止流動(dòng)相受阻、泵內(nèi)壓力劇增甚至損壞柱頭。
3.沖洗進(jìn)樣閥:為防止緩沖鹽和樣品殘留在進(jìn)樣閥中,每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。

五、色譜柱的使用和維護(hù)
1.避免反沖:色譜柱一般不能反沖,只有生產(chǎn)者指明該柱可以反沖時(shí),才可以反沖除去留在柱頭的雜質(zhì)。
2.預(yù)柱和保護(hù)柱:選擇使用適宜的流動(dòng)相(尤其是pH值),以避免固定相被破壞。可以在進(jìn)樣器前面連接一預(yù)柱或保護(hù)柱,以保護(hù)分析柱。
3.調(diào)節(jié)流速:調(diào)節(jié)流速時(shí)應(yīng)緩慢進(jìn)行,避免壓力和溫度的急劇變化及任何機(jī)械震動(dòng)。
六、儀器的校準(zhǔn)和日常維護(hù)
1.定期校準(zhǔn):為了確保戴安高效液相色譜儀的穩(wěn)定性和準(zhǔn)確性,應(yīng)定期進(jìn)行儀器校準(zhǔn),確保各項(xiàng)參數(shù)在規(guī)定范圍內(nèi)。
2.日常維護(hù):包括流動(dòng)相的過濾、脫氣、泵密封墊的清洗、系統(tǒng)管路的清洗等,應(yīng)堅(jiān)持進(jìn)行,以防止色譜柱堵塞、系統(tǒng)壓力過大、色譜峰異常等故障的發(fā)生。
七、樣品制備的注意事項(xiàng)
1.濃度:樣品的濃度應(yīng)適中,避免過高或過低影響分離效果。
2.溶劑:應(yīng)使用與液相色譜儀兼容的溶劑進(jìn)行樣品溶解和稀釋。
3.過濾:樣品溶液應(yīng)經(jīng)過適當(dāng)?shù)倪^濾處理,以去除可能影響分離效果的雜質(zhì)。
避免戴安高效液相色譜儀的常見操作失誤需要從流動(dòng)相處理、泵維護(hù)、梯度洗脫、六通閥使用和維護(hù)、色譜柱使用和維護(hù)、儀器校準(zhǔn)和日常維護(hù)以及樣品制備等多個(gè)方面入手。操作人員應(yīng)嚴(yán)格遵循操作規(guī)程和保養(yǎng)要求,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性和儀器的長(zhǎng)期穩(wěn)定運(yùn)行。