沉降菌監測的操作方法與注意事項！

沉降菌監測的操作方法與注意事項！

一、方法

《醫藥工業潔凈室（區）沉降菌的測試方法》（GB/T16294-2010）

沉降法：通過自然沉降原理收集在空氣中的生物粒子于培養基平皿中，經若干時間，在適宜的條件下使其繁殖到可見菌落并進行計數，以平板培養皿中的菌落數來判定潔凈環境內的活微生物數，并以此評定潔凈室（區）的潔凈度。

二、沉降皿

沉降皿：直徑90mm*15mm

培養基：大豆酪蛋白瓊脂（TSA）

       沙氏瓊脂（SDA）

培養條件：同浮游菌監測

培養基質量：

 應符合2015年版《中國藥典》中“（1921）藥品微生物實驗室質量管理指導原則”的相關要求。

1）培養基制備要求

2）培養基貯藏要求

3）培養基的質量控制試驗

用于環境監控的培養基須特別防護，要雙層包裝和終端滅菌，如果不能采用終端滅菌的培養基，那么在使用前應進行的預培養以防止外來的污染物帶到環境中及避免出現假陽性結果。

關鍵問題：暴露蒸發失水，會降低培養基的某些微生物的生長。

單向氣流暴露4小時，TSA版失重16%

為了延長暴露和培養基的時間，同時確保平皿仍然提供可靠的結果，沉降皿可以澆注到一個特定的高澆注線。

包裝：通常是雙重或三重包裝，這取決于潔凈室的級別。外層包裝進入下一個高級別的潔凈室中之后被移除。對于*（ISO5級）潔凈室和隔離器，三層透明包裝時合適的。

隔離器的沉降皿：內層的包裝材料必須是過氧化氫蒸汽不可滲透的，以確保這種常用的消毒劑不會轉移的培養基上，采樣后抑制微生物生長，使用為隔離器設計的培養基。

三、監測

1）人員的清潔、消毒和著裝

2）在溫度、濕度、壓力的測試之后進行

3）明確測試狀態，靜態測試人員不得多于2人，一般應動態監測

4）開啟凈化空調系統

單向流、靜態10min以上，非單向流30min以上

5）少采樣點數

注：*（單向流）面積指送風口表面積；任何小的潔凈區采樣點不得少于2個。

6）采樣位置：

離地面0.8-1.5m左右，高于工作面

關鍵設備或關鍵區域，可增加采樣點

7）采樣次數：每個點1次

8）采樣時間：靜態30分鐘；動態4小時

單碟暴露時間可以少于4小時，同一位置可使用對個沉降碟連續進行監測并累積計數。

9）少培養皿數：

四、注意事項

1）采取一切措施防止采樣污染和其他人為對樣本的污染。

2）采樣注意事項：同懸浮粒子監測

3）培養基質量

4）陰性對照試驗  每次或每個區域取1個對照培養皿

5）日常監測：*區及無菌隔離系統采樣點數目應不小于3個且每個采樣點的平皿數應不小于1個。

五、結果判斷：

每個測點的沉降菌平均濃度必須低于所選定評定標準中的界限。

在靜態測試時，若某測點的沉降游菌的平均濃度超過評定標準，應重新采樣兩次，兩次測試結果均合格才能判為符合。

六、限度的理解：*＜1cfu/碟

舉例：監測了左中右3個位置，1碟/位置

不合格結果：3個沉降碟平均菌落數≥1cfu

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