冷凍切片技術的實驗原理與方法！

冷凍切片技術的實驗原理與方法！

一、實驗目的

⒈掌握冷凍切片的方法

⒉掌握冷凍切片的用途

二、實驗原理

冷凍切片是借助低溫使組織凍結達到一定的硬度并通過冰起支撐作用來進行切片的一種方法。

⒈速凍 可減小冰晶直徑，避免組織細胞損傷。

⒉制冷 壓縮機佛里昂制冷、半導體溫差電制冷

三、實驗材料

新鮮動物肝臟

四、實驗方法

⒈準備 將儀器 打開，樣品臺溫度調至-40 ℃。

⒉取材 組織必須新鮮，盡可能不經(jīng)水洗。取材時應避免組織擠壓，防止人為假象 。樣品大小5X5X3mm。

⒊速凍 將樣品放在樣品臺上，樣品四周加水加固，冷凍5－10min.

⒋切片 升高溫度至-15℃（視樣品而定），約5min后開始切片，厚度6-15um。

⒌制片 將切片直接放在載波片上或先放在盛水（固定液）的培養(yǎng)皿中再轉移到載波片上。

⒍染色觀察 吸干水，加一滴蘇木精，加蓋玻片，用顯微鏡觀察。

⒎記錄 將觀察的結果繪于實驗報告上，整理自己用過的物品。

附：切片溫度的設定

腦 -12℃

肝臟 -14℃

腎臟 -16℃

肌肉 -20℃

皮膚 -25℃

多脂肪組織 -30℃

經(jīng)過固定的組織 -5℃ ～-10℃

附：快速制 片

1 固定 70％乙醇5～10min；

2 水洗 2min；

3 蘇木精染色 5～10min；

4 脫色 0.1%HCl 至變紅；

5 藍化0.1NaOH 變藍；

6 水洗 5～10s ；

7 脫水 70% 2min ；

8 伊紅染色 5～10min ；

9 脫水 乙醇2minX2；

10 透明 二甲苯 3min；

11 封片 中性樹膠封片。

冷凍切片機的基本操作：

⒈在使用前2小時開啟電源，并將溫度設定在-25℃;

⒉將適當大小和厚度的標本放在蘑菇狀杯上，加上冷凍蠟，夾在切片機的固定槽內;

⒊準備好玻片，選擇切片厚度，搖動手柄，即可做成切片;

⒋將做成的切片小心的吸附在玻璃片上;

⒌使用結束后關閉電源,清潔腔體和擦干水氣, 做好使用記錄。

⒍為讓水蒸氣蒸發(fā)，請不要馬上關閉切片機的上蓋移門，應到第二天再關。

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