Hoechst 33342/PI雙染試劑盒正在熱銷的產(chǎn)品：GLP-2 胰高血糖樣肽-2抗體無水硫鈣 ≥99.99% metals basis
GLP-2 胰高血糖樣肽-2抗體鋁 CP
GLUT1 葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白1抗體硬酯鋁 CP
GLUT2 葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白2抗體硫氫 AR
GLUT3 葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白3抗體溴水 ACS, 99.5%
GLUT4 葡萄糖轉(zhuǎn)運蛋白4抗體芐溴化 98%
Gly
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
英文名稱：Apoptotic Cell Hoechst 33342/PI Detection Kit
產(chǎn)品規(guī)格：100T
貨號：FS-X9827
產(chǎn)品介紹:
熒光染料Hoechst33342 能少許進入正常細胞膜，使其染上低藍色，而凋亡細胞的膜通透性增強，因此進入凋亡細胞中的Hoechst33342 比正常細胞的多，熒光強度要比正常細胞中要高，此外，凋亡細胞的染色體DNA 的結(jié)構(gòu)發(fā)生了改變從而使該染料能更有效地與DNA 結(jié)合，并且凋亡細胞膜上的p-糖蛋白泵功能受到損傷不能有效地將Hoechst33342 排出到細胞外使之在細胞內(nèi)積累增加等都使凋亡細胞的藍色熒光增強。而PI 染料是不能進入細胞膜完整的正常細胞和凋亡細胞中，即活細胞對PI 染料拒染，而壞死細胞由于膜完整性在早期即已破損，可被PI 染料染色。 用Hoechst33342 結(jié)合PI 染料對凋亡細胞進行雙染色，就可在流式細胞儀上將正常細胞、凋亡細胞和壞死細胞區(qū)別開來。在雙變量流式細胞儀的散點圖上，這三群細胞表現(xiàn)分別為：正常細胞為低藍色/低紅色（Hoechst33342+/PI+），凋亡細胞為高藍色/低紅色（Hoechst33342++/PI+），壞死細胞為低藍色/高紅色（Hoechst33342+/PI++） 儲存：2-8℃，避光，有效期一年。 |
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
Ⅱ型前膠原基端原肽(PⅡNT)英文名：PⅡNT 磷化熱休克蛋白β5/α晶狀體球蛋白B/αB-crystallin抗體包裝50mg
Ⅱ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅡ)英文名：CTXⅡ 1號染色體開放閱讀框167抗體包裝1g
Ⅱ型膠原(COL2)英文名：COL2 1號染色體開放閱讀框168抗體包裝250mg
ⅡD組磷脂A2(PLA2G2D)英文名：PLA2G2D 1號染色體開放閱讀框170抗體包裝250mg
ⅡA組磷脂A2(PLA2G2A)英文名：PLA2G2A 1號染色體開放閱讀框172抗體包裝1g
Ⅰ型前膠原羧基端原肽(PⅠCP)英文名：PⅠCP 1號染色體開放閱讀框173抗體包裝5g
Ⅰ型前膠原基端原肽(PⅠNP)英文名：PⅠNP 1號染色體開放閱讀框174抗體包裝25g
Ⅰ型前膠原(PCⅠ)英文名：PCⅠ 1號染色體開放閱讀框177抗體包裝5g
Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基端肽(CTXⅠ)英文名：CTXⅠ 1號染色體開放閱讀框180抗體包裝1g
Ⅰ型膠原交聯(lián)基端肽(NTXⅠ)英文名：NTXⅠ 1號染色體開放閱讀框182抗體包裝1g
Ⅰ型膠原α2(COL1α2)英文名：COL1α2 1號染色體開放閱讀框183抗體包裝25g
Ⅰ型膠原α1(COL1α1)英文名：COL1α1 1號染色體開放閱讀框187抗體包裝5g
Ⅰ型膠原(COL1)英文名：COL1 1號染色體開放閱讀框189抗體包裝5g
90kDa熱休克蛋白β1(HSP90β1)英文名：HSP90β1 1號染色體開放閱讀框190抗體包裝100ml
90kDa熱休克蛋白αA1(HSP90αA1)英文名：HSP90αA1 1號染色體開放閱讀框192抗體包裝25ml
輪枝菌Verticillium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品乙肝表面抗原大蛋白試劑盒原花青B2;Procyanidin B
球孢白僵菌Beauveria│bassiana (Bals.-Criv.) Vuill. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BR乙脫氫試劑盒原花青B1;Procyanidin B
鏈霉菌屬菌種Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>98%,標準品乙呋試劑盒乙酰紫堇靈;Acetylcorynoli
Hoechst 33342/PI雙染試劑盒 叔丁基二硫抗mannobioside糖抗體
亮白曲霉 2,2-二氟-3-羥基戊乙酯鋅-α2脂蛋白
烏克蘭毛霉 2-溴-3,4-二氟苯巖藻糖基化觸珠蛋白
短柄帚霉 6-甲基-3H-噻吩[2,3-d]嘧啶-4-酮膽固-25-羥化
鼠李糖乳桿 磺酚S受體自身抗體
產(chǎn)氣腸桿* 3,5-二溴-2-吡受體
新疆鹽單胞 5-溴-4-甲基-1H-吲唑S轉(zhuǎn)移Mu1
禾谷鐮孢 2--3-氟-5-硝基吡啶乙酰CoA羧化
總狀共頭霉 噻吩并[3,2-b]吡啶-7-蛋白激M2
大孢聯(lián)軛霉 5-溴吲唑-3-甲系統(tǒng)性紅斑狼瘡IgG
黑曲霉 2-乙硫基-5-硝基吡啶系統(tǒng)性紅斑狼瘡IgA
圍小叢殼 L-肌肽鋅系統(tǒng)性紅斑狼瘡IgM
蠟樣芽胞桿 4-苯氧基芐糖化血紅蛋白
博斯氏屬 2-叔丁苯纖維蛋白單體
葉球形微桿 4,6-二-2-甲氧基嘧啶酮激M2
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
