PBS緩沖液公司正在出售的產(chǎn)品： Serpin Peptidase Inhibitor Clade B Member 13 (SERPINB13)絲蛋白抑制因子B支成員13(SERPINB13)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Serpin Peptidase Inhibitor Clade B Member 12 (SERPINB12)絲蛋白抑制因子B支成員12(SERPIN
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備：
1）準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640：GIBCO，貨號21875-091)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37℃，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配，液氮儲存。
二．細胞處理：
1）復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中（水面要低于凍存管蓋部）搖晃解凍，移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2）細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞，傳代可參考以下方法：
方法一：收集細胞，1000RPM，常溫條件下離心5分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻，將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
產(chǎn)品屬于：
產(chǎn)品名稱：PBS緩沖液
英文名稱：PBS
貨號：FS-02X0065
規(guī)格：500ml
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點：
1.研究的對象是活細胞 在實驗過程中，根據(jù)要求可始終保持細胞活力，并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況，包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。 2.研究條件可以人為控制 pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件，可以根據(jù)實際需要進行人為的控制，同時，可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察，這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。 3.研究的樣本可以達到比較均一性 通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后，所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞，需要時，可采用克隆化等方法使細胞達到純化。 4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄 采用各種研究技術(shù)：如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設(shè)備。 |
注意事項：
1. 接收到細胞，肉眼觀察細胞培養(yǎng)基顏色，顯微鏡觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收到時的培養(yǎng)瓶拍一張照片，顯微鏡拍收到時的細胞100X,200X各一張）。 2.用75%的酒精消毒（建議配置75%的酒精的水是滅菌過的）。 3.嚴格無菌操作，打開細胞培養(yǎng)瓶。 4.將細胞培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出（嚴禁直接傾倒），放入另一無菌容器中（建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細胞）。 5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細胞表面，洗3-4次遍，加入0.05%-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細胞變圓，輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細胞脫落，加入終止液終止。 6.1000rpm，5min離心，重懸細胞。 7.換新的細胞培養(yǎng)瓶，37℃，5%CO2培養(yǎng)。 |
Matrix Metalloproteinase 8 (MMP8)基質(zhì)金屬蛋白8(MMP8)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Microsomal Glutathione S Transferase 2 (MGST2)微粒體谷胱甘S轉(zhuǎn)移2(MGST2)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Plasminogen Activator Inhibitor 1 (PAI1)纖溶原激活物抑制因子1(PAI1)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Nerve Growth Factor (NGF)神經(jīng)生長因子(NGF)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Neurotrophin 3 (NT3)神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Neurotrophin 3 (NT3)神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Neurotrophin 3 (NT3)神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Neurotrophin 3 (NT3)神經(jīng)營養(yǎng)因子3(NT3)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Osteoprotegerin (OPG)骨保護(OPG)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Osteoprotegerin (OPG)骨保護(OPG)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Creatine Kinase, Muscle (CKM)肌肌激(CKM)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Creatine Kinase, Muscle (CKM)肌肌激(CKM)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Cathepsin L (CTSL)組織蛋白L(CTSL)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
Cathepsin L (CTSL)組織蛋白L(CTSL)檢測試劑盒(聯(lián)免疫吸附試驗法)規(guī)格：48T/96T
PBS緩沖液C1orf180/AIDA 1號染色體開放閱讀框80抗體規(guī)格: 0.2ml
APP/ABPP APP/ABPP淀粉樣前體蛋白抗體規(guī)格: 0.1ml
APP695 (CT) 淀粉樣前體蛋白抗體（C端）規(guī)格: 0.1ml
EML4/C2orf180 限制過度增殖相關(guān)蛋白EML4抗體規(guī)格: 0.2ml
C2orf24 2號染色體開放閱讀框24抗體規(guī)格: 0.2ml
C2orf18/ANT2BP 2號染色體開放閱讀框18抗體規(guī)格: 0.2ml
APR3/C2orf28 凋亡相關(guān)蛋白3抗體規(guī)格: 0.2ml
ECRG4/C2orf40 食道癌相關(guān)基因4蛋白抗體規(guī)格: 0.2ml
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
