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細(xì)胞傳代問題解決方案:
1、傳代密度過高
一旦細(xì)胞養(yǎng)太久至融合度過高(>90%)才傳代,容易使細(xì)胞產(chǎn)生老化現(xiàn)象,甚至是堆疊,再消化細(xì)胞時不易吹打成單顆細(xì)胞,即便再重新鋪盤傳代,細(xì)胞也無法回到原本的特性了。(如:單層細(xì)胞,沒長滿就發(fā)生堆疊現(xiàn)象)。
解決方案:
盡量避免融合度過高,鏡下觀察融合度約達(dá)到80%即可傳代分盤。
細(xì)胞融合度:在細(xì)胞培養(yǎng)中指的是細(xì)胞在培養(yǎng)表面(培養(yǎng)皿/瓶)所占的比例。
2、傳代密度過低
哺乳動物貼壁培養(yǎng)細(xì)胞,若細(xì)胞培養(yǎng)到80-90%密度需要開始傳代,在傳代接種細(xì)胞密度過低,細(xì)胞間距離太遠(yuǎn),就無法在細(xì)胞間產(chǎn)生黏附及通信作用,幫助信號傳導(dǎo)并活化細(xì)胞;總體細(xì)胞量不足,分泌的生長因子濃度會不足以產(chǎn)生利于生長的微環(huán)境,以上皆會造成增殖速度遲緩或細(xì)胞死亡。
解決方案:
細(xì)胞傳代時,要進(jìn)行準(zhǔn)確的細(xì)胞計數(shù),確保鋪盤的密度。
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