UNG (Uracil N-Glycosylase)

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niao嘧啶 DNA 糖基酶(Uracil N-Glycosylase,UNG)又名 Uracil-DNA Glycosylase, UDG, 來源于 E. coliuracil N-glycosylase 基因的重組表達(dá)，分子量為 26kDa。其可催化含niao嘧啶的單鏈和雙鏈 DNA 釋放游離niao嘧啶。
它對 RNA 無活性，主要應(yīng)用于 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物的防污染。
它的作用原理基于：如果在 PCR 反應(yīng)中以 dUTP 替代dTTP摻入DNA 中，形成了含 dU 堿基的 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物，該酶能選擇性斷裂單鏈和雙鏈 DNA 中 U 基的糖苷鍵，降解該 PCR 擴(kuò)增產(chǎn)物。

活性定義：在標(biāo)準(zhǔn) PCR 反應(yīng)體系下，37℃條件下，1 小時(shí)降解 1μg 含 dU 堿基的單鏈 DNA 的酶量為 1 活性單位。
反應(yīng) Buffer：UNG與絕大多數(shù)的PCR 聚合酶反應(yīng)緩沖液都是兼容的，但在高離子濃度(>100mM)下活性會(huì)受到抑制。
酶儲(chǔ)存液：20 mM Tris-HCl, 50 mM NaCl, 1 mM DTT, , 50%Glycerol, 0.1% (w/v) Triton X-100, pH 7.5。
儲(chǔ)存：置于-20°C 可保存 2 年，避免反復(fù)凍融。
熱失活：95°C，5min。
操作方法
1.配制反應(yīng)體系
Super Taq DNA Polymerase 0.5 μl
dNTP/dUTP Mixture 2~4 μl
10XHi PCR Buffer 5 μl
Uracil N-Glycosylase (5U/μl) 0.2~0.5 μl
Primers (10μM each ) 1 μl
Template DNA 10 ng-1 μg
DEPC-treated Water up to 50 μl
2. PCR 擴(kuò)增循環(huán)參數(shù)
循環(huán)數(shù) 溫度 時(shí)間
去污染 50°C 2min
熱失活 95°C 5min
30-40 Cycles
95°C 20s
50~60°C 20s
72°C 1kb/1min
Last Cycle 72°C 5min
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