實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 分類(lèi) | 貨號(hào) |
諾如病毒GⅠ型核酸檢測(cè)試劑盒 | 熒光PCR法 | FS-P9839 |
PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
雜交瘤株；HX00818A10形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-EGFR Monoclonal Antibody
雜交瘤株；AbM-F14FTSSCLS0167-KLH#15形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-APEX1 Polyclonal Antibody
人肝癌；LIXC-501形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Anti-ITGB3(N-term) Monoclonal Antibody
雜交瘤株；4F12形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-IL18BP Monoclonal Antibody
雜交瘤株；7B5形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-APOH Polyclonal Antibody
雜交瘤株；7F1形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-T Polyclonal Antibody
雜交瘤株；1C6形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-ALB Polyclonal Antibody
小鼠骨髓干系；MBMME1形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-EZR Polyclonal Antibody
雜交瘤株；DC-C形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-SLC4A7 Polyclonal Antibody
小鼠骨髓干系；MBMME2形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-SERPINA1 Polyclonal Antibody
雜交瘤株；1C12形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-IGF2BP3 Monoclonal Antibody
人成纖維；HF-1形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Anti-LRRC57 Polyclonal Antibody
人食管鱗癌系；ZEC-127形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Anti-TLR7 Monoclonal Antibody
人食管鱗癌系；ZEC-145形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)生物素標(biāo)記的兔抗長(zhǎng)爪沙鼠IgG
兔正常角膜上皮；RNCEC/HL-032RabbitNormalCornealEpithelialCellsRNCEC/HL-032形態(tài)特性: 淋巴母樣生長(zhǎng)特性: 懸浮生長(zhǎng)Anti-PSMC6 Polyclonal Antibody
人食管鱗癌系；ZEC-166形態(tài)特性: 上皮樣生長(zhǎng)特性: 貼壁生長(zhǎng)Anti-NTRK3 Polyclonal Antibody
諾如病毒GⅠ型核酸檢測(cè)試劑盒兔過(guò)氧化物酶體增殖因子活化受體γ(PPAR-γ)ELISA試劑盒HumanProteinZELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔子血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)ELISA試劑盒HumanP-SelectinELISAkit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔子補(bǔ)體蛋白4(C4)ELISA試劑盒HumanReninELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔子氧化低密度脂蛋白(OxLDL)ELISA試劑盒humanResistinELISAKIT產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔子胰島素(INS)ELISA試劑盒Humanrudimentalbovineserumalbumincheck-upELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子1(IGF-1)ELISA試劑盒humanschistosomaELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔子胰島素樣生長(zhǎng)因子2(IGF-2)ELISA試劑盒HumanSecretinELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
兔腎素(Renin)ELISA試劑盒Humansignaltransduction-Smad1ELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。
