使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
參數規格：
產品名稱：大麥內標準gamma-hordein基因PCR試劑盒
貨號:CP96874
產品規格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規參照基因，較佳地管家基因，優選地為RPPH1的擴增區域，其中所述質粒載體為本領域常規質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
?實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
以下是大麥內標準gamma-hordein基因PCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
Bovine Cr(Creatinine) ELISA Kit資源名稱刺囊毛霉種屬:Mucor spinosus提供形式:凍干物
Bovine Es(ESTROGEN) ELISA Kit資源名稱休哈塔假絲酵母休哈塔亞種種屬:Candida│shehatae var. shehatae分離基物:棘草花金龜體內
Bovine Lep(Leptin) ELISA Kit資源名稱棘孢木霉種屬:Trichoderma│asperellum提供形式:凍干物
Bovine Ifabp(Intestinal Fatty Acid Binding Protein) ELISA Kit資源名稱長枝木霉種屬:Trichoderma│longibrachiatum提供形式:凍干物
Bovine L-FABP(Liver Fatty acid Binding Protein) ELISA Kit資源名稱赤散囊菌種屬:Eurotium│rubrum分離基物:雙望目鏡
Bovine TFF3(Trefoil factor 3) ELISA Kit資源名稱赭曲霉種屬:Aspergillus│ochraceus提供形式:凍干物
Bovine ACTG2(Actin Gamma 2, Smooth Muscle) ELISA Kit資源名稱棒束青霉種屬:Penicillium│clavigerum提供形式:凍干物
Bovine ALPI(Alkaline Phosphatase, Intestinal) ELISA Kit資源名稱鮮綠青霉種屬:Penicillium│viridicatum分離基物:空氣
Bovine CLDN3(Claudin 3) ELISA Kit資源名稱膨端青霉種屬:Penicillium│inflatum分離基物:冷杉根部
Bovine NOS3/eNOS(Nitric oxide synthase, endothelial) ELISA Kit資源名稱粟酒裂殖酵母種屬:Schizosaccharomyces│pombe提供形式:凍干物
Bovine IgE(Immunoglobulin E) ELISA Kit資源名稱降酮短桿菌種屬:Brevibacterium│ketosoreductum分離基物:土壤
Bovine PAP(Plasmin-Antiplasmin Complex) ELISA Kit資源名稱格氏李斯特氏菌種屬:Listeria│grayi提供形式:凍干物
Bovine TL-3(Interleukin-3) ELISA Kit資源名稱布雷正青霉種屬:Eupenicillium│brefeldianum提供形式:凍干物
Bovine DAO(Diamine Oxidase) ELISA Kit資源名稱微細正青霉種屬:Eupenicillium│parvum分離基物:土壤
Bovine PTGES(Prostaglandin E synthase) ELISA Kit資源名稱紅色籃狀菌種屬:Talaromyces│ruber分離基物:植物塊根
Bovine Jun(Jun Proto-Oncogene) ELISA Kit資源名稱赭鮭色正青霉種屬:Eupenicillium│ochrosalmoneum分離基物:玉米粉
Bovine FG(Fibrinogen) ELISA Kit資源名稱腸沙門氏菌腸亞種種屬:Salmonella│enterica subsp. enterica提供形式:凍干物
Bovine OC(Osteocalcin) ELISA Kit資源名稱摩氏摩根氏菌種屬:Morganella morganii提供形式:凍干物
Bovine PaRathyroid hormone ELISA Kit資源名稱腸沙門氏菌腸亞種旺茲沃思血清型種屬:Salmonella│enterica subsp. enterica serotype Wandsworth提供形式:凍干物
Bovine ALOX12(Arachidonate-12-Lipoxygenase) ELISA Kit資源名稱熱生腫塊芽孢桿菌種屬:Tuberibacillus│calidus分離基物:堆肥
大麥內標準gamma-hordein基因PCR試劑盒BOLA-DQA2大豆酪蛋白瓊脂顆粒培養基大豆酪蛋白瓊脂顆粒培養基用于普通的或營養要求較高的細菌以及用于醫藥工業潔凈室無菌程度的監測及消毒劑效果的測試。【檢驗原理】酪蛋白胰酶消化物和大豆粉木瓜蛋白酶消化物提供氮源、維生素和生長因子;維持均衡的滲透壓;瓊脂是培養基的凝固劑。
F11R營養肉湯顆粒培養基營養肉湯顆粒培養基用于一般細菌培養、復壯、增菌等，也可用于消毒劑定性消毒效果測定?！緳z驗原理】蛋白胨和粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源;能維持均衡的滲透壓。
CD11A|Integrin alpha L|ITGAL|LFA 1|LFA 1A|LFA1A營養肉湯顆粒培養基營養肉湯顆粒培養基用于一般細菌培養、復壯、增菌等?！緳z驗原理】胨和牛肉浸出粉提供氮源、維生素、氨基酸和碳源;能維持均衡的滲透壓。
B7-2|CD86|Activation B7-2 antigen|B70|B7-2 antigen|B-lymphocyte activation antigen B7-2|BU63|CD28 antigen ligand 2|CD28LG2|CD86 antigen|CD86 molecule|CTLA-4 counter-receptor B7.2|FUN-1|LAB72|T-lymphocyte activation antigen CD86XLD瓊脂顆粒培養基XLD瓊脂顆粒培養基用于臨床標本及食品中沙門氏菌、志賀氏菌的選擇性分離培養。【檢驗原理】酵母膏粉提供氮源、維生素、生長因子;維持均衡的滲透壓;木糖、乳糖、蔗糖為可發酵糖類，產酸使酚紅指示劑變黃;去氧膽酸鈉抑制革蘭氏陽性菌，但不影響沙門氏菌的生長;硫代硫酸鈉可被某些細菌還原硫化氫，與檸檬酸鐵銨中的鐵鹽生成黑色硫化鐵;瓊脂是培養基的凝固劑;酚紅為pH指示劑。
CD8A|T-cell surface glycoprotein CD8 alpha chain|T-lymphocyte differentiation antigen T8|Leu-2EC肉湯顆粒培養基EC肉湯顆粒培養基用于多管發酵法測定糞大腸菌群和大腸桿菌的確證試驗。【檢驗原理】胰蛋白胨提供碳氮源;3號膽鹽抑制革蘭氏陽性菌，特別抑制革蘭氏陽性桿菌和糞鏈球菌;乳糖是可發酵的糖類;磷酸氫二鉀和磷酸二氫鉀為緩沖劑;可維持均衡的滲透壓。
HCK亞鹽胱氨酸增菌液顆粒培養基亞酸鹽胱氨酸增菌液顆粒培養基用于沙門氏菌選擇性增菌培養?！緳z驗原理】蛋白胨提供碳源和氮源滿足細菌生長的需求;乳糖是可發酵的糖類;氫鈉抑制革蘭氏陽性菌和非沙門氏菌的大多數革蘭氏陰性腸道菌;磷酸鹽是緩沖劑;L-胱氨酸為還原劑。
58 kDa microsomal protein|Disulfide isomerase ER 60|ER protein 57|ER protein 60|ER60|ERp57|ERp60|ERp61|GRP57|GRP58|HsT17083|P58|PDIA3|PI PLC|Protein disulfide isomerase A3玫瑰紅鈉瓊脂顆粒培養基玫瑰紅鈉瓊脂培養基(顆粒培養基)供藥品和生物制品中霉菌和酵母菌的計數、分離和培養用?！緳z驗原理】胨提供碳源和氮源;葡萄糖提供能源;磷酸二氫鉀為緩沖劑;硫酸鎂提供必須的微量元素;玫瑰紅鈉作為選擇性抑菌劑可抑制細菌的生長，并可減緩某些霉菌因生長過快而導致菌落漫延生長;瓊脂是培養基的凝固劑。
CCR1膽鹽乳糖顆粒培養基膽鹽乳糖顆粒培養基用于藥品中大腸桿菌和綠膿桿菌的增菌培養?！緳z驗原理】胨提供碳氮源;乳糖是可發酵的糖類;維持均衡的滲透壓;磷酸氫二鈉和磷酸二氫鉀為緩沖劑;牛膽鹽和去氧膽酸鈉為選擇性抑菌劑。
