參數規(guī)格：
產品名稱：番茄內標準Apx基因探針法PCR試劑盒
貨號:CP96885
產品規(guī)格：50T
產品運輸：低溫運輸
產品保存：-20℃保存
產品有效期：一年
運輸：低溫
注意事項：1．基礎程序；2．擴增溫度和延伸溫度；3．反應時間；4．循環(huán)次數；5．PCR 反應液的配制；6．PCR技術的基本原理；7．PCR的反應動力學；8．PCR擴增產物；9．PCR反應體系與反應條件。
實驗方法步驟：
方法
1：在冰浴中，按以下次序將各成分加入一無菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix （2mM）
4 μl 引物1（10pM）
2 μl 引物2（10pM）
2 μl Taq酶 （2U/μl）
1 μl DNA模板（50ng-1μg/μl）
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2：調整好反應程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，在72℃ 保溫7min。
3：結束反應，PCR產物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4：PCR的電泳檢測：如在反應管中加有石蠟油，需用100μl進行抽提反應混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
使用方法:
一、稀釋標準曲線樣品（以 10E2-10E7 拷貝/μL 這 6 個 10 倍稀釋度為例）。由于標準品濃度非常高，因此下列稀釋操作一定要在獨立的區(qū)域進行，千萬不能污染樣品或本試劑盒的其他成分）。
1. 標記 6 個離心管，分別為 7，6，5，4，3，2。
2. 用帶芯槍頭分別加入 45 μL 熒光 PCR 模板稀釋液，*用帶芯槍頭，下同）。
3. 在 7 號管中加入 5 μL 陽性對照（濃度為 1×10E8 拷貝/μL，試劑盒提供)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E7 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
4. 換槍頭，在 6 號管中加入 5 μL 1×10E7 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E6 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
5. 換槍頭，在 5 號管中加入 5 μL 1×10E6 拷貝/μL 的陽性對照(上步稀釋所得)，充分震蕩 1 分鐘，得 1×10E5 拷貝/μL 的標準曲線樣品。放冰上待用。
6. 重復上面的操作直到得到 6 個稀釋度的標準曲線樣品。放冰上待用。
二、樣品 DNA 的制備
7. 用自選方法純化樣品的 DNA，本產品跟市場上絕大多數核酸純化產品兼容。
8. 如果有 N 個樣品，則需要進行 N+2 個樣品提取，多出的一個用作樣品制備陽性對照管、另一個用作樣品制備陰性對照管。
三、設置 qPCR 反應（20μL 體系，在樣品制備室進行）
9. 如果做定量分析并且只做 1 次重復，則標記 N+9 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），6 個用于標準曲線。如果做定性分析，并且只做 1 次重復，則標記 N+4 個 PCR 管，其中 N+2 個用于上步得到的 N+2 個樣品，1 個用于 PCR 陰性對照（用水做模板），1 個用于PCR 陽性對照。
PCR檢測方法包括以下步驟：
(1)將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線；
(2)待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中步驟(1)為：將參照基因與待測目的基因片段等比例連接，克隆到同一個質粒載體上，構建一種可同時用于參照基因以及待測目的基因擴增檢測的標準品，并將所得標準品按照濃度梯度稀釋后同時用于繪制參照基因以及待測目的基因的標準曲線。
其中所述參照基因為本領域常規(guī)參照基因，較佳地管家基因，優(yōu)選地為RPPH1的擴增區(qū)域，其中所述質粒載體為本領域常規(guī)質粒載體，較佳地為PCR克隆載體，優(yōu)選地為TA cloning載體，所述TA cloning載體較佳地為pMD18-T載體。其中所述標準品的核酸序列如序列表中SEQ ID NO:6所示。所述的等比例較佳地為1：1。由于標準品中待測目的基因與參照基因的比例為1:1，解決了目前相對標準曲線法應用中目的基因與參照基因的濃度比例關系難以控制的問題，提高HER2基因擴增檢測的可靠性。
步驟(2)為：待測樣本與步驟(1)所述標準品經同步進行實時熒光定量PCR擴增后，目的基因與參照基因按照各自的標準曲線計算各自的拷貝數，計算待測樣本的目的基因與參照基因拷貝數比值，即得目的基因的拷貝數相對定量檢測結果。
其中所述待測目的基因為本領域常規(guī)待測目的基因，較佳地為腫瘤或者疾病的特異性基因，更佳地為HER2基因的擴增區(qū)域，所述熒光定量PCR擴增為本領域常規(guī)熒光定量PCR擴增方法，所述熒光定量PCR擴增方法較佳地為多通道熒光定量PCR擴增，更佳地為雙通道熒光定量PCR擴增。
以下是番茄內標準Apx基因探針法PCR試劑盒公司正在熱銷的產品：
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Goat FSH(Follicle Stimulating Hormone) ELISA Kit資源名稱腦膜炎奈瑟菌種屬:Neisseria meningitidis分離基物:腦膜炎患者的脊髓液
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Goat IL-2(Interleukin 2) ELISA Kit資源名稱湯卜遜沙門氏菌種屬:Salmonella thompson提供形式:凍干物
Guinea pig ACE(Angiotensin I Converting Enzyme) ELISA Kit資源名稱山夫頓堡沙門氏菌種屬:Salmonella senftenberg提供形式:凍干物
Guinea pig ANP(Atrial Natriuretic Peptide) ELISA Kit資源名稱丙型副傷寒沙門氏菌種屬:Salmonella paratyphi-C提供形式:凍干物
Guinea pig Bax(Bcl-2 Associated X Protein) ELISA Kit資源名稱多主枝孢霉種屬:Cladosporium herbarum提供形式:凍干物
Guinea pig Bcl-2(B-cell Leukemia/Lymphoma 2) ELISA Kit資源名稱腸沙門氏菌腸亞種波那雷恩血清型種屬:Salmonella enterica subsp. enterica serotype Bonariensis分離基物:進口凍白蛤肉
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Guinea pig C3(Complement Component 3) ELISA Kit資源名稱亮桿菌屬種屬:Leucobacter sp.分離基物:皮革廠附近受污染的土壤和水樣
番茄內標準Apx基因探針法PCR試劑盒IL-1raGVPC平板(軍團菌選擇性平板)產品用途：GVPC平板用于環(huán)境水樣及臨床樣本中軍團菌的選擇性培養(yǎng)分離。(ISO)。產品規(guī)格：20個/盒儲存條件：2-8℃避光保存
IL12A中國藍瓊脂培養(yǎng)基平板產品用途：中國藍瓊脂培養(yǎng)基平板用于檢測腸道細菌的弱選擇培養(yǎng)基。產品規(guī)格：20個/盒儲存條件：2-8℃避光保存
IL-13HE瓊脂平板產品用途：用于腸道致病菌特別是沙門氏菌和志賀氏菌的選擇性分離培養(yǎng)。規(guī)格：20個/盒儲存條件：2-8℃避光保存
IL-5XLD瓊脂培養(yǎng)基平板產品用途：XLD瓊脂培養(yǎng)基平板用于革蘭氏陰性腸桿菌特別是志賀氏菌和沙門氏菌的選擇性分離培養(yǎng)。(GB、ISO、美國FDA、EP、USP)。產品規(guī)格：20個/盒儲存條件：2-8℃避光保存
IFN-γ|IFNG|IFG|IFI|Type II Interferon四號瓊脂平板產品用途：含亞碲酸鉀，四號瓊脂平板用于霍亂弧菌的選擇性分離培養(yǎng)。產品規(guī)格：20個/盒儲存條件：2-8℃避光保存
CTLA 8|CTLA8|IL 17|IL 17A|IL17|IL-17|IL17A|interleukin 17ATCBS瓊脂培養(yǎng)基平板產品用途：TCBS瓊脂培養(yǎng)基平板用于腸道致病性弧菌特別是霍亂弧菌和副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)。(GB、美國FDA、SN、ISO)。產品規(guī)格：20個/盒儲存條件：2-8℃避光保存
cTn-ISC增菌液產品用途：SC增菌液用于沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)。(GB、SN、美國FDA、ISO、USP)產品規(guī)格：225ml/X10袋冷藏：2-8℃
FBP2|FBPase 2|fructose 1|6 bisphosphatase 2李氏增菌肉湯1產品用途：李氏增菌肉湯1用于李斯特氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)。(GB)產品規(guī)格：225ml/X10袋冷藏：2-8℃
