服務流程:
公司產品僅用于科研接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數據分析——結果交付——售后服務。
產品名稱 | 規格 | 貨號 |
TLR2受體染料法熒光定量PCR試劑盒 | 50次 | YS-P013710 |
PCR反應鑒定——PCR反應條件:
循環步驟 | 溫度 | 時間 | 循環數 |
預變性 | 94℃ | 5 min | 1 |
變性 | 94℃ | 10 sec | 30-40 |
退火 | 50-65℃ | 20 sec | 30-40 |
延伸 | 72℃ | 30 sec/kb | 30-40 |
終延伸 | 72℃ | 5 min | 1 |
反應五要素:
參加PCR反應的物質主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應的關鍵,PCR 產物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設計引物應遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現非特異條帶。ATGC最好隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內部出現二級結構,避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數第二個堿基,應嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列最好有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應與核酸序列數據庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量產生所需要的結果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。
組成及試劑配制:
1、酶標板:一塊(96孔)
2、 標準品(凍干品): 2瓶,請臨用前15分鐘內配制。每瓶以樣品稀釋液稀釋至0.5ml,蓋好后室溫靜置大約10分鐘,同時反復顛倒/搓動以助溶解,其濃度為200 U/L,然后做系列倍比稀釋(注:不要直接在板中進行倍比稀釋),分別配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,樣品稀釋液直接作為空白孔 0 U/L。如配制100 U/L標準品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述標準品加入含有0.3ml樣品稀釋液的Eppendorf管中,混勻即可,其余濃度以此類推。
3、 樣品稀釋液:1×20ml。
4、 檢測稀釋液A:1×10ml。
5、 檢測稀釋液B:1×10ml。
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
其中引物與模板的正確結合是關鍵。引物與模板的結合及引物鏈的延伸是遵循堿基配對原則的。聚合酶合成反應的忠實性及Taq DNA聚合酶耐高溫性,使反應中模板與引物的結合(復性)可以在較高的溫度下進行,結合的特異性大大增加,被擴增的靶基因片段也就能保持很高的正確度。再通過選擇特異性和保守性高的靶基因區,其特異性程度就更高。
(2) 靈敏度高
PCR產物的生成量是以指數方式增加的,能將皮克(pg=10-12g)量級的起始待測模板擴增到微克(ug=10-6g)水平。能從100萬個細胞中檢出一個靶細胞;在病毒的檢測中,PCR的靈敏度可達3個RFU(空斑形成單位);在細菌學中zui小檢出率為3個細菌。
(3) 簡便、快速
PCR反應用耐高溫的Taq DNA聚合酶,一次性地將反應液加好后,即在DNA擴增液和水浴鍋上進行變性-退火-延伸反應,一般在2~4 小時完成擴增反應。擴增產物一般用電泳分析,不一定要用同位素,無放射性污染、易推廣。
(4) 對標本的純度要求低
不需要分離病毒或細菌及培養細胞,DNA 粗制品及總RNA均可作為擴增模板。可直接用臨床標本如血液、體腔液、洗嗽液、毛發、細胞、活PCR技術概論。
猴甘露糖受體C1(MRC1) 炔諾孕酮(標準品)胃動素抗體
猴生長停滯特異性蛋白6(Gas6)BML-275 HCl,物質C鹽酸鹽甘露聚糖結合凝集素抗體
猴核因子κB (NFκB)巰咪唑(標準品)膜相關環指蛋白11抗體
猴八聚體轉錄因子2B(OTF2B) 枸櫞酸氯米芬(標準品)結核分枝桿菌Ag85B抗體
猴腺苷酸環化酶相關蛋白1(CAP1) 磺酸雙氫麥角堿(標準品)磷酸化微管相關蛋白4抗體
猴因子信號轉導抑制因子3(SOCS3)6-異麥冬黃烷酮A(標準品)磷酸化微管相關蛋白4抗體
猴粘附蛋白相互作用蛋白(CYTIP) 鄰磺酰(標準品)人水痘帶狀皰疹病gE蛋白抗體
猴T生長因子-Ⅲ(TCGF-Ⅲ) 2-氯-4-(標準品)黑色素瘤相關抗原G1/肝癌相關蛋白4抗體
猴成纖維生長因子結合蛋白2(FGFBP2)氯普噻噸(標準品)黑色素瘤相關抗原B6抗體
猴酸性磷酸酶1(ACP1) 氯普噻噸黑色素瘤相關抗原C2抗體
猴碳酸酐酶IX (CA9)咪唑(標準品)黑色素瘤抗原樣因2抗體
猴腦型肌酸激酶(CKB) 瑞他帕林;瑞他莫林黑色素瘤相關抗原C1抗體
猴腸脂肪酸結合蛋白(IFABP)氫加蘭他敏(標準品)黑色素瘤相關抗原B2抗體
猴泛素結合酶E2C(UBE2C) 氫山莨菪堿(標準品)黑色素瘤相關抗原B4抗體
猴趨化因子CXC配體16 (CXCL16)氫山莨菪堿(標準品)組蛋白酰轉移酶抗體(腦膜瘤表達抗原5)
猴絨毛膜促性腺激素β(CGβ) 乳果糖(標準品)磷酸化微管相關蛋白4抗體
TLR2受體染料法熒光定量PCR試劑盒CXCL16/FITC 熒光素標記CXC趨化因子16抗體IgG硫酸鋁銨 99.99% metals basis
CXC-R1 /FITC 熒光素標記表面趨化因子受體1抗體IgG硝酸鋁 SP
CXC-R2/FITC 熒光素標記表面趨化因子受體2抗體IgG偏釩酸銨 99.99% (metals basis)
CXCR3/CD183/FITC 熒光素標記表面趨化因子受體3抗體/G蛋白偶聯受體IgG磷酸氫二銨 SP
CXCR3/CD183(rat,mo) /FITC 熒光素標記兔抗大、小鼠表面趨化因子受體3抗體IgG重鉻酸銨 SP
CXCR5/CD185/FITC 熒光素標記表面趨化因子受體5抗體IgG氯化銨 SP
CXCR6/FITC 熒光素標記表面趨化因子受體6抗體IgG鉬酸銨 SP
CXCR7/RDC1/FITC 熒光素標記表面趨化因子受體7抗體IgG碳酸鋇 SP