手機訪問更快捷
更多流量 更易傳播
隨時掌握行業(yè)動態(tài)
網(wǎng)絡(luò)課堂 行業(yè)直播
PCR反應(yīng)條件優(yōu)化控制:
1. PCR反應(yīng)的緩沖液提供合適的酸堿度與某些離子 。
2. 鎂離子濃度 總量應(yīng)比dNTPs的濃度高,常用1.5 mmol/L?!?/p>
3. 底物濃度dNTP以等摩爾濃度配制,20~200 umol/L?!?/p>
4. TaqDNA聚合酶2.5U(100 ul)?! ?/p>
5. 引物 濃度一般為0.1 ~0.5 umol/L。
6. 反應(yīng)溫度
(1)變性溫度和時間95℃,30 s。
(2)退火溫度和時間 低于引物Tm值5 ℃左右,一般在45~55℃。
(3)延伸溫度和時間72℃,1 min/kb(10 kb內(nèi))。
(4)Tm值=4(G+C) +2(A+T)
7. 循環(huán)次數(shù) :一般為25 ~30次。循環(huán)數(shù)決定PCR擴增的產(chǎn)量。模板初始濃度低,可增加循環(huán)數(shù)以便達到有效的 擴增量。但循環(huán)數(shù)并不是可以無限增加的。一般循環(huán)數(shù)為30個左右,循環(huán)數(shù)超過30個以后,DNA聚合酶活性逐漸達到飽和,產(chǎn)物的量不再隨循環(huán)數(shù)的增加而增加,出現(xiàn)了所謂的“平臺期”。
相關(guān)產(chǎn)品
免責(zé)聲明
客服熱線: 13199863987
加盟熱線: 13199863987
媒體合作: 0571-87759945
投訴熱線: 0571-87759942
下載儀表站APP
Ybzhan手機版
Ybzhan公眾號
Ybzhan小程序