血清最大的劣勢就是不穩定,不穩定原因如下:
1、來源不穩定
以胎牛血清為例,懷孕母牛在屠宰前腹部被剖開,取出胎牛,在低溫無菌條件下,刺破胎牛的心臟以獲取血清。就這一條,動物倫理組織就可以把你攔住嘮嘮。另外,牛血清必須來自有文件證明無牛海綿狀腦病的牛群或國家,我國在對牛血清的質量《中國生物制品主要原輔料質控標準 2000》中提出比較嚴格的標準要求,包括蛋白質含量,細菌、真菌、支原體、牛病毒、大腸桿菌噬菌體、細菌內毒素,細胞增殖支持等檢查。
2、組分不穩定
還有最讓人鬧心的,動物血清成分復雜,其組分及含量常和動物性別(公胎牛,母胎牛,如激素)、年齡、生理狀態、營養條件不同而有差異,是不是覺得特像中藥。還有,盡管血清大部分成分是已知的,但仍然存在不清楚的組分,所以導致標準化極其困難。所以,師兄師姐經常會告訴你說,不同生產廠家的血清差異很大,就是同一廠家生產的不同批次血清差異也很大。
3、用法不穩定
實驗習慣的不同,都可能導致細胞實驗結果的不穩定,比如,有人四度過夜融化,有人急性子,直接扔進水浴鍋。新手拿到一瓶血清,第一個問題就是問自己,要不要滅活?度了一下答案,嚓,還是中藥,說啥的都有。還有,別忘了,血清同時含有內毒素、血色素、補體、抗體等其他有害成分,影響細胞生長甚至導致細胞死亡,對某些實驗來說,極為重要。
如此的不穩定,該怎么在實驗過程中盡可能的解決呢?
1、土豪和有得選擇的實驗室,請選擇無血清培養基。
2、不要頻繁更換血清牌子,不同廠家血清來源,生產工藝,包裝運輸等都有很大差異,盡量不要更換牌子。
3、選定品牌后,對于經過測試過的好用的血清,同一個批次多囤積一些,計算本次實驗的大概用量,然后在多加20%的儲備,放在-20或-80度保存。
4、細胞實驗建議每個人用自己的培養基,PBS,yi酶等試劑以及用具,保持實驗條件一致性,避免交叉污染,別給自己添堵,也別給別人添堵。
5、如果實在要更換血清,先將細胞在新的血清里傳兩到三代,適應新的條件后,細胞狀態穩定,再進行后續的實驗。
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