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細(xì)胞周期操作步驟

來源:上海邦景實業(yè)有限公司   2025年05月14日 15:55  

 細(xì)胞周期指細(xì)胞一個世代所經(jīng)歷的時間。從一次細(xì)胞分裂結(jié)束到下一次分裂結(jié)束為一個周期。細(xì)胞周期反應(yīng)了細(xì)胞增殖速度。

操作步驟:

1、細(xì)胞生長至指數(shù)期時,向培養(yǎng)液中加入BrdU,使終濃度為10μg/ml。

2、44小時加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。

3、48小時后常規(guī)消化細(xì)胞至離心管中,注意培養(yǎng)上清的漂浮細(xì)胞也要收集到離心管中。

4、常規(guī)染色體制片(見第三部分:染色體技術(shù))。

5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。

6、棄去2×SSC液,流水沖洗。

7、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。

8、鏡檢100個分裂相,計、二、三、四細(xì)胞期分裂指數(shù)。

9、計算: 細(xì)胞周期(Tc)=48/{(M1+2M2+3M3+4M4)/100}(小時)

附:(1)BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存。

(2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克,加水至100ml,4℃保存。


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