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細胞周期操作步驟

來源:上海邦景實業有限公司   2025年05月14日 15:55  

 細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間。從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期。細胞周期反應了細胞增殖速度。

操作步驟:

1、細胞生長至指數期時,向培養液中加入BrdU,使終濃度為10μg/ml。

2、44小時加秋水仙素,使每ml中含0.1μg。

3、48小時后常規消化細胞至離心管中,注意培養上清的漂浮細胞也要收集到離心管中。

4、常規染色體制片(見第三部分:染色體技術)。

5、染色體玻片置56℃水浴鍋蓋上,鋪上2×SSC 液,距紫外燈管6cm處紫外照射30分鐘。

6、棄去2×SSC液,流水沖洗。

7、Giemsa液染色10分鐘,流水沖洗,晾干。

8、鏡檢100個分裂相,計、二、三、四細胞期分裂指數。

9、計算: 細胞周期(Tc)=48/{(M1+2M2+3M3+4M4)/100}(小時)

附:(1)BrdU配制: BrdU 10mg十雙蒸水10ml 4℃下避光保存。

(2)2×SSC配制: NaCl 1.75克,檸檬酸三鈉•2H2O 0.88克,加水至100ml,4℃保存。


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