培養基在使用過程中應該注意什么？

1.培養基的滅菌

一般培養基可采用121℃ 高壓蒸汽滅菌15分鐘的方法。在各種培養基制備方法中，如無特殊規定，即可用此法滅菌。某些畏熱成分，如糖類，應另行配成20% 如或更高的濃液，以過濾或間歇滅菌法消毒，以后再用無菌操作技術、定量加于培養基。明膠培養基亦應用較低溫度滅菌。血液、體液和抗生素等則應從無菌操作技術抽取和加入于經冷卻約50℃ 左右的培養基中。

瓊脂斜面培養基應在滅菌后立即取出、待冷至55-60℃時，擺置成適當斜面、待其自然凝固。已配制好的培養基必須及時滅菌（在2小時內），避免微生物生長繁殖而消耗養分，改變培養基的酸堿度。高溫可破壞培養基的營養成分，還會使瓊脂的凝膠強度下降，因此必須嚴格控制滅菌溫度和時間，并且不可重復滅菌。

2.培養基的使用應在有效期內，不同批號的培養基不要混合使用

干粉培養基應保存在陰涼干燥處，要避譽首免陽光直射；未開瓶的培養基在室溫下的可以保存2年，開瓶后的干粉培養基易吸濕，應注意防潮并在6個月內用完。應定期對儲存中的培養基進行常規檢查，如容器密閉性復查、開封日期、內容物的感官檢查，如果培養基發生結塊、顏色異常和其他變質跡象就不能再使用。

3.培養基的保存

滅菌以后培養基應該迅速冷卻至所需溫度，避免長時間保存在滅菌鍋內，造成過度滅菌，影響培養基的營養成分或選擇性效果。所配制的培養基的量，應該是在最長保存期限內正好使用完(2-25℃避光的環境，若保存于非密封容器，3周內使用，密閉容器可使用一年----2010版藥典規定。）含染料的培養基應閉光保存；倒好的瓊脂平板如果配制的當天未使用完，應于冷藏保存，如果保存時間超過2天，應將其放入密封的塑料袋中保存；配好的肉湯類培養基如果保存時間超過2個星期，應將其放在帶有螺旋蓋的試管或其它密閉的試管或容器中防止態鏈蒸發。

4..購置培養基時要求供應商提供產品質控證書

使用前要先對外觀、批號、pH 值、滅菌要求、選擇性等進行初步評估。

5.培養基的配制

使用的蒸煮鍋不得為銅鍋或鐵鍋，以防有微量銅或鐵混入培養基中，使細菌不易生長。盡量使用不銹鋼鍋加熱溶化，也可放入大燒杯或大燒瓶中置高壓蒸汽滅菌器或流動蒸汽消毒器中蒸煮溶化。容器的大小需大于復水后培養基總體積的2倍以上，避免在加熱溶解過程中，培養基溢出；含有瓊脂粉的培養基，在加熱溶解之前可以浸泡數分鐘；加熱培養基時一定要進行攪拌，特別是瓊脂類培養基。為避免燒焦和沸騰溢出，對于少量的培養基盡量使用沸水浴進行加熱。在鍋中溶化時、可先用溫水加熱并隨時擾動，以防焦化、如發現有焦化現象、該培養基即不能使用，應重新制備。待大部分固體成分溶化后，再用較小火力使所有成分溶化，迄至煮沸。在加熱溶化過程中，因蒸發而丟失的水分，最后必須加以補足。

6.培養基的性能測試

①外觀。控制制備好的培養基應有相應的顏色，一般的培養基應澄清、無渾濁、無沉淀。使用前應檢查培養基的顏色是否發生變化，是否蒸發／脫水。

②pH測定  

微生物必須在適宜的pH范圍內才能正常生長繁殖或體現其生物特性。培養基配方要求的pH為滅菌或消毒后的pH 值，即培養基使用前的pH，并應在25℃溫帆虛孫度下采用精密酸度計進行測量，固體瓊脂培養基應以特殊的膠體表面測量電極進行測量。使用過程中，如果需要調整培養基的pH，應用1mol/L  Na0H或 lmol/L  HCL調整，注意不可反復調pH，否則會影響培養基的滲透壓。

③污染控制 從每批制備好的培養基中選取部分進行污染測試(無菌試驗)，確定無微生物生長方可使用。

④性能測試 可按2010版藥典附錄微生物限度檢查法及無菌檢查法中的規定進行適用性檢查。

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